Inhibitory izomeraz białkowych disiarczkowych stanowią nową klasę środków przeciwzakrzepowych cd

Aktywność hamujÄ…ca tych zwiÄ…zków byÅ‚a podobna niezależnie od natury glikozydu w pozycji 3 w pierÅ›cieniu C lub w podstawnikach w pierÅ›cieniu B. W przeciwieÅ„stwie do metabolitów, które nie zawierajÄ… 3-O-glikozydu, takich jak tamaryksetynÄ™, izorhamnetynÄ™, diosmetynÄ™ lub kwercetyna nie hamowaÅ‚a aktywnoÅ›ci reduktazy PDI, niezależnie od tego, czy byÅ‚y hydroksylowane czy metoksylowane przy 3. i 4. pozycje na pierÅ›cieniu B (rysunek 2). Te badania pokazujÄ…, że aktywność hamujÄ…ca przeciwko PDI dla tej grupy flawonoli jest ograniczona do tych z wiÄ…zaniem 3-O-glikozydowym. Kwercetyno-3-rutozyd hamuje agregacjÄ™ pÅ‚ytek i wytwarzanie fibryny za poÅ›rednictwem komórek Å›ródbÅ‚onka in vitro. Hamowanie PDI za poÅ›rednictwem przeciwciaÅ‚ blokuje agregacjÄ™ pÅ‚ytek in vitro (2, 4, 5). Wykazano wczeÅ›niej, że 3-rutozyd Quercetin-3 hamuje agregacjÄ™ pÅ‚ytek krwi indukowanÄ… przez kolagen lub ADP (19, 20). W oczekiwaniu na badania formowania skrzepliny in vivo u myszy ocenialiÅ›my wpÅ‚yw 3-rutozydu na kwercetynÄ™ na agregacjÄ™ pÅ‚ytek krwi za poÅ›rednictwem PAR4. WczeÅ›niej wykazaliÅ›my, że aktywacja pÅ‚ytek krwi z udziaÅ‚em PAR4 jest wymagana do tworzenia skrzepów in vivo u myszy (21). Kwercetyno-3-rutozyd hamowaÅ‚ agregacjÄ™ przemytych ludzkich pÅ‚ytek krwi indukowanych przez agonistÄ™ peptydu PAR4 AYPGKF (Figura 4A). Hamowanie agregacji pÅ‚ytek przez 3-rutynozynÄ™ kwercetyny byÅ‚o caÅ‚kowicie odwrócone, gdy pÅ‚ytki inkubowane z 3-rutynozynÄ… kwercetyny zostaÅ‚y przemyte przed stymulacjÄ… AYPGKF (Figura 4B). Po wlewie do myszy rercetydu kwercetyny-3, osocze bogate w pÅ‚ytki otrzymane od myszy wykazaÅ‚o zmniejszonÄ… agregacjÄ™ w odpowiedzi na AYPGKF w porównaniu z myszami, którym podawano sam noÅ›nik (Figura 4C). Badania te wskazujÄ…, że dziaÅ‚anie przeciwpÅ‚ytkowe 3-rutozydu na kwercetynÄ™ utrzymuje siÄ™ po wlewie. Figura 4-Rutozyd kwercetyna hamuje agregacjÄ™ pÅ‚ytek. (A) MyjÄ…ce ludzkie pÅ‚ytki krwi (2×108 pÅ‚ytek krwi / ml) inkubowano z samym noÅ›nikiem (czarny), 30 | jM 3-rutynozyd kwercetyny (niebieski), 45 | jM 3-rutozydu kwercetyny (czerwony) lub antybiotykiem. PrzeciwciaÅ‚o PDI, RL90 (zielone), przez 15 minut, a nastÄ™pnie stymulowane 50. M peptydem PAR4 AYPGKF. (B) Myje ludzkie pÅ‚ytki (2×108 pÅ‚ytek krwi / ml) inkubowano albo z noÅ›nikiem (czarny) albo z 60. M kwercetyno-3-rutozydem (czerwonym) przez 15 minut lub inkubowano z podÅ‚ożem, a nastÄ™pnie przemyto (ciemnoniebieski) lub 60 M kwercetyna-3-rutozyd, a nastÄ™pnie przemywanie (jasnoniebieski) i nastÄ™pna stymulacja 50 .M peptydu PAR4 AYPGKF. (C) Kwercetyno-3-rutozyd podawano dożylnie myszom dożylnie w dawce 0,5 mg / kg. Pięć minut po infuzji, krew zostaÅ‚a uzyskana przez nakÅ‚ucie serca, i wyizolowano osocze bogate w pÅ‚ytki. Osocze bogate w pÅ‚ytki krwi od myszy leczonych kwercetynÄ…-3-rutozydem (czerwone) lub kontrolÄ… noÅ›nika (czarne) stymulowano 200. M AYPGKF. PDI jest uwalniany z komórek HUVEC po aktywacji za poÅ›rednictwem lasera (8). Po inkubacji w osoczu te aktywowane komórki HUVEC wytwarzajÄ… fibrynÄ™. Hamowanie PDI blokuje wytwarzanie fibryny w tym teÅ›cie (8). Inkubacja HUVEC z 3-rutynozynÄ… kwercetyny przed aktywacjÄ… za poÅ›rednictwem lasera spowodowaÅ‚a znaczne zmniejszenie tworzenia fibryny (Figura 5, A i B). Jednak aktywacja komórek, mierzona przez wewnÄ…trzkomórkowÄ… mobilizacjÄ™ wapnia po stymulacji laserowej, byÅ‚a porównywalna w traktowanych lub traktowanych buforem komórkach Å›ródbÅ‚onka z kwercetynÄ…-3-rutynozynÄ… (Suplementowa Figura 2). Tak wiÄ™c wytwarzanie fibryny z kwercetynÄ…-3-rutozydem blokowaÅ‚o etap daleki od aktywacji komórek Å›ródbÅ‚onka i mobilizacji wapnia. HamujÄ…cy wpÅ‚yw 3-rutozydu na kwercynÄ™ na wytwarzanie fibryny byÅ‚ zależny od dawki, przy IC50 okoÅ‚o 5 (3M kwercetyno-3-rutozydu i 95% redukcji fibryny przy 10 .M 3-rutozydu na kwercetynÄ™ (P <0,001) ( Figura 5). Podobne hamowanie wytwarzania fibryny obserwowano w obecnoÅ›ci funkcji blokujÄ…cej przeciwciaÅ‚o PDI (Figura 5C). Tak wiÄ™c, 3-rutozyd kwercetyny hamuje zarówno agregacjÄ™ pÅ‚ytek, jak i wytwarzanie fibryny in vitro. Figura 5cukcety-3-rutozyd hamuje wytwarzanie fibryny in vitro. (A i B) Reprezentatywne obrazy HUVEC o staÅ‚ym i immunobarwieniu, które zostaÅ‚y aktywowane przez uszkodzenie laserem w obecnoÅ›ci osocza i wapnia (B) za pomocÄ… lub (A) bez 3-rutozydu kwercetyny (10 .M). Komórki utrwalono po aktywacji laserem i wybarwiono na obecność fibryny (czerwony), FITC-falloidyny (zielony) i DAPI (niebieski). (C) Kwantyfikacja sygnaÅ‚u fibryny wykrywanego na hodowanych komórkach Å›ródbÅ‚onka wyrażona jako procentowe hamowanie fibryny po aktywacji lasera (Å›rednia . SD). ** P <0,01, *** P <0,001. Oryginalne powiÄ™kszenie, × 60. Paski skali: 10 .m. Kwercetyno-3-rytynozyd hamuje powstawanie zakrzepów in vivo [patrz też: apteka caÅ‚odobowa bydgoszcz, mazak gostyÅ„, bromatologia i chemia toksykologiczna ] [podobne: ziaja dermatologiczna baza z tlenkiem cynku, test obciążenia glukozÄ… 75g normy, vegamedica ]