Aktywność hamująca tych związków była podobna niezależnie od natury glikozydu w pozycji 3 w pierścieniu C lub w podstawnikach w pierścieniu B. W przeciwieństwie do metabolitów, które nie zawierają 3-O-glikozydu, takich jak tamaryksetynę, izorhamnetynę, diosmetynę lub kwercetyna nie hamowała aktywności reduktazy PDI, niezależnie od tego, czy były hydroksylowane czy metoksylowane przy 3. i 4. pozycje na pierścieniu B (rysunek 2). Te badania pokazują, że aktywność hamująca przeciwko PDI dla tej grupy flawonoli jest ograniczona do tych z wiązaniem 3-O-glikozydowym. Kwercetyno-3-rutozyd hamuje agregację płytek i wytwarzanie fibryny za pośrednictwem komórek śródbłonka in vitro. Hamowanie PDI za pośrednictwem przeciwciał blokuje agregację płytek in vitro (2, 4, 5). Wykazano wcześniej, że 3-rutozyd Quercetin-3 hamuje agregację płytek krwi indukowaną przez kolagen lub ADP (19, 20). W oczekiwaniu na badania formowania skrzepliny in vivo u myszy ocenialiśmy wpływ 3-rutozydu na kwercetynę na agregację płytek krwi za pośrednictwem PAR4. Wcześniej wykazaliśmy, że aktywacja płytek krwi z udziałem PAR4 jest wymagana do tworzenia skrzepów in vivo u myszy (21). Kwercetyno-3-rutozyd hamował agregację przemytych ludzkich płytek krwi indukowanych przez agonistę peptydu PAR4 AYPGKF (Figura 4A). Hamowanie agregacji płytek przez 3-rutynozynę kwercetyny było całkowicie odwrócone, gdy płytki inkubowane z 3-rutynozyną kwercetyny zostały przemyte przed stymulacją AYPGKF (Figura 4B). Po wlewie do myszy rercetydu kwercetyny-3, osocze bogate w płytki otrzymane od myszy wykazało zmniejszoną agregację w odpowiedzi na AYPGKF w porównaniu z myszami, którym podawano sam nośnik (Figura 4C). Badania te wskazują, że działanie przeciwpłytkowe 3-rutozydu na kwercetynę utrzymuje się po wlewie. Figura 4-Rutozyd kwercetyna hamuje agregację płytek. (A) Myjące ludzkie płytki krwi (2×108 płytek krwi / ml) inkubowano z samym nośnikiem (czarny), 30 | jM 3-rutynozyd kwercetyny (niebieski), 45 | jM 3-rutozydu kwercetyny (czerwony) lub antybiotykiem. Przeciwciało PDI, RL90 (zielone), przez 15 minut, a następnie stymulowane 50. M peptydem PAR4 AYPGKF. (B) Myje ludzkie płytki (2×108 płytek krwi / ml) inkubowano albo z nośnikiem (czarny) albo z 60. M kwercetyno-3-rutozydem (czerwonym) przez 15 minut lub inkubowano z podłożem, a następnie przemyto (ciemnoniebieski) lub 60 M kwercetyna-3-rutozyd, a następnie przemywanie (jasnoniebieski) i następna stymulacja 50 .M peptydu PAR4 AYPGKF. (C) Kwercetyno-3-rutozyd podawano dożylnie myszom dożylnie w dawce 0,5 mg / kg. Pięć minut po infuzji, krew została uzyskana przez nakłucie serca, i wyizolowano osocze bogate w płytki. Osocze bogate w płytki krwi od myszy leczonych kwercetyną-3-rutozydem (czerwone) lub kontrolą nośnika (czarne) stymulowano 200. M AYPGKF. PDI jest uwalniany z komórek HUVEC po aktywacji za pośrednictwem lasera (8). Po inkubacji w osoczu te aktywowane komórki HUVEC wytwarzają fibrynę. Hamowanie PDI blokuje wytwarzanie fibryny w tym teście (8). Inkubacja HUVEC z 3-rutynozyną kwercetyny przed aktywacją za pośrednictwem lasera spowodowała znaczne zmniejszenie tworzenia fibryny (Figura 5, A i B). Jednak aktywacja komórek, mierzona przez wewnątrzkomórkową mobilizację wapnia po stymulacji laserowej, była porównywalna w traktowanych lub traktowanych buforem komórkach śródbłonka z kwercetyną-3-rutynozyną (Suplementowa Figura 2). Tak więc wytwarzanie fibryny z kwercetyną-3-rutozydem blokowało etap daleki od aktywacji komórek śródbłonka i mobilizacji wapnia. Hamujący wpływ 3-rutozydu na kwercynę na wytwarzanie fibryny był zależny od dawki, przy IC50 około 5 (3M kwercetyno-3-rutozydu i 95% redukcji fibryny przy 10 .M 3-rutozydu na kwercetynę (P <0,001) ( Figura 5). Podobne hamowanie wytwarzania fibryny obserwowano w obecności funkcji blokującej przeciwciało PDI (Figura 5C). Tak więc, 3-rutozyd kwercetyny hamuje zarówno agregację płytek, jak i wytwarzanie fibryny in vitro. Figura 5cukcety-3-rutozyd hamuje wytwarzanie fibryny in vitro. (A i B) Reprezentatywne obrazy HUVEC o stałym i immunobarwieniu, które zostały aktywowane przez uszkodzenie laserem w obecności osocza i wapnia (B) za pomocą lub (A) bez 3-rutozydu kwercetyny (10 .M). Komórki utrwalono po aktywacji laserem i wybarwiono na obecność fibryny (czerwony), FITC-falloidyny (zielony) i DAPI (niebieski). (C) Kwantyfikacja sygnału fibryny wykrywanego na hodowanych komórkach śródbłonka wyrażona jako procentowe hamowanie fibryny po aktywacji lasera (średnia . SD). ** P <0,01, *** P <0,001. Oryginalne powiększenie, × 60. Paski skali: 10 .m. Kwercetyno-3-rytynozyd hamuje powstawanie zakrzepów in vivo [patrz też: apteka całodobowa bydgoszcz, mazak gostyń, bromatologia i chemia toksykologiczna ] [podobne: ziaja dermatologiczna baza z tlenkiem cynku, test obciążenia glukozą 75g normy, vegamedica ]