Zakłócenie ECE-1 i ECE-2 ujawnia rolę enzymu konwertującego endotelinę-2 w mysim rozwoju serca ad 5

Te dane potwierdziły, że oba allele ECE-2 zostały zakłócone w ECE-2. /. myszy. Aby zbadać możliwą nadmiarowość funkcjonalną między ECE-1 i ECE-2, wprowadziliśmy ECE-2. /. mutacja na tło zerowe ECE-1. ECE-1 + / .; ECE-2. /. myszy wytworzono przez pierwsze skrzyżowanie ECE-1 + /. myszy do ECE-2. /. myszy. Powstały ECE-1 + / 5; ECE-2. /. myszy były zdrowe i płodne i były nieodróżnialne od ECE-1 + /. myszy. Te myszy następnie krzyżowano między sobą w celu uzyskania ECE-1 (3 (3; ECE-2. /. zarodki. Ponieważ ECE-1. /. zarodki wykazały śródmiejską śmiertelność zarodków z niepełną penetracją (12), najpierw zbadaliśmy, czy mutacja zerowa ECE-2 wpłynęła na śmiertelność zarodków w ECE-1 (3. /. zarodki. ECE-1 + / .; ECE-2. /. myszy krzyżowano, a samice ciężarne uśmiercano przez cesarskie cięcie między E16.0 i E20.0. Genotypowanie powstałych zarodków ujawniło, że żywy ECE-1 (3/3; ECE-2. /. Zarodki składały się z zaledwie ośmiu (4,9%) z 162 zbadanych zarodków. Stosunek podwójnych homozygotycznych zarodków, które przeżyły do momentu urodzenia, był zwykle niższy niż stosunek pojedynczego ECE-1 (3 / /. zarodki, 16 (7,1%) z 225 zarodków, chociaż nie było statystycznie istotnej różnicy między tymi dwoma. Brutalne badania krótkoterminowe lub E20.0 ECE-1. / .; ECE-2. /. zarodki wykazały hipoplastyczne małżowiny i żuchwę oraz skurczoną przednią szyję, która była identyczna z ECE-1. /. pojedyncze zarodki nokautowe (12). Nie było żadnych dodatkowych nieprawidłowości, które byłyby unikalne dla ECE-1. / .; ECE-2. /. zarodki. Poziomy peptydów ET w podwójnie homozygotycznych zarodkach E12.5. W celu zbadania roli ECE-2 w cięciu proteolitycznym dużego ET-1 in vivo, dojrzałe poziomy ET-1 zmierzono za pomocą EIA w ekstraktach z całych zarodków E12.5 z homozygotycznych ECE-1 (3 / P, typu dzikiego. homozygotyczny ECE-2 (3 (3, i podwójny homozygotyczny ECE-1 (3; ECE-2. /. zarodki. Ponieważ liczba żywych ECE-1. /. i ECE-1. / .; ECE-2. /. zarodki zmniejszają się po E12.5 ze względu na śmiertelność zarodków, zebraliśmy zarodki w E12.5, gdy dostępna była największa liczba żywych zarodków i gdy ECE-2 jest wyrażany obficie. Połączone dojrzałe poziomy ET-1 / ET-2 w typie dzikim i ECE-2. /. zarodki nie różnią się, natomiast ECE-1. /. pojedynczo zmutowane zarodki wykazały znacząco obniżone (ale dobrze wykrywalne) poziomy dojrzałego ET-1 / ET-2 w porównaniu z poziomami dzikiego typu i ECE-2 (3). zarodki. W podwójnym homozygotycznym ECE-1 (3/5; ECE-2. /. zarodków, połączony poziom ET-1 / ET-2 nie różnił się znacząco od tego dla pojedynczego homozygotycznego ECE-1 (3 / /. mutanty (Figura 4). Odkrycia te wskazują, że brak ECE-2 nie wpływał znacząco na wytwarzanie dojrzałego ET-1 / ET-2 in vivo przy E12.5, co oceniono na poziomie całych zarodków. Figura 4 Poziomy ET tkankowe w zarodkach E12.5. Połączony poziom dojrzałej ET-1 / ET-2 mierzy się w typie dzikim (n = 8), ECE-1 (3 / l. (n = 5), ECE-2. /. (n = 7) i ECE-1 (3); ECE-2. /. (n = 7) zarodki. Wartości to środki. SD. Analiza statystyczna niesparowanego testu ucznia. AP <0,05 w porównaniu z typem dzikim. NS, nieistotne. Zaostrzone nieprawidłowości serca w ECE-1 (3; ECE-2. /. zarodki. Badania histologiczne podwójnego homozygotycznego E16.0-E20.0 ECE-1 (3/3; ECE-2. /. zarodki wykazywały defekty w wielu tkankach pochodzących z grzebienia nerwowego, które były identyczne z obserwowanymi w ECE-1 (3 /. pojedyncze zarodki mutantów (12). Ponadto ECE-1. / .; ECE-2. /. zarodki rozwinęły nieprawidłowości serca, które były cięższe niż te z ECE-1. /. pojedynczych zmutowanych zarodków (tabela 1). W przekrojach poprzecznych zarodków typu dzikiego pień płucny (P na ryc. 5a) był umiejscowiony bardziej rostralnie i przedni względem wypływu aorty (Ao na ryc. 5d, dwa kanały odpływowe nie pojawiły się w tej samej płaszczyźnie poprzecznej, patrz także rysunek 7a ). Ponadto, aorta wstępująca jest widoczna z prawej i tylnej części tułowia płucnego w wyniku skrzyżowania dwóch linii wypływu (Figura 5a). W jednym ECE-1. /. myszy z nokautem, przepływ aorty został przesunięty rostralnie w prawo, tak że pień płucny i aorta wstępująca pojawiły się w tej samej płaszczyźnie (ryc. 5e, patrz także rysunek 7b). Odległość między aortą wstępującą a pniem płucnym została skrócona w porównaniu z zarodkami typu dzikiego (ryc. 5b). Jednak spirala przegrody aortalno-płucnej występowała normalnie, tak że względne wyrównanie pomiędzy dwoma przewodami wypływowymi wydawało się normalne. W ECE-1. / .; ECE-2. /. zarodki, wyrównanie dwóch różnych dróg odpływowych zostało znacznie upośledzone. Strumień aorty był zlokalizowany przed i po prawej stronie tułowia płucnego, a dwa przekroje były widoczne obok siebie na przekroju poprzecznym (Figura 5f, patrz także Figura 7c). Aorta wstępująca przesunęła się bardziej w kierunku przednim do pnia płucnego w porównaniu z ECE-1. /. zarodki (ryc. 5c) [podobne: ubezpieczenie nfz za granicą, hydrokolonoterapia wrocław, zaburzenia afektywne dwubiegunowe ] [więcej w: hydrokolonoterapia warszawa, hydrokolonoterapia poznań, hydrokolonoterapia wrocław ]