Wirusowa indukcja fenotypu przewlekłej astmy i segregacja genetyczna z ostrej odpowiedzi czesc 4

Wartość istotności dla wszystkich analiz wynosiła 0,05. Wyniki. Myszy pozbawione ICAM-1 (3 są chronione przed zapaleniem dróg oddechowych po zapaleniu oskrzelików wywołanym przez SeV. Wstępne eksperymenty wykazały, że zaszczepienie SeV 50. 50,000 EID50 powodowało spektrum chorób, począwszy od braku wykrywalnego efektu (przy 50 EID50 lub nieaktywowanym UV SeV w dowolnym inokulum) do odwracalnego zapalenia oskrzelików (przy 5000 EID50) do śmiertelnego odoskrzelowego zapalenia płuc (przy 50 000 EID50) na podłożu genetycznym C57BL / 6J (nr ref. 31 i dane nie pokazane). Dlatego wykorzystaliśmy inokulację SeV przy 5000 EID50 do dalszych eksperymentów mających na celu modelowanie wirusowego zapalenia oskrzeli / zapalenia oskrzelików u ludzi. Za pomocą tego inokulum, replikacja SeV i indukcja ekspresji ICAM-1 były kolokalizowane głównie do nabłonka oskrzelowo-lowego (Figura 1a). Myszy typu dzikiego i myszy ICAM-1 zerowały się ponownie do tego poziomu infekcji naciekiem komórek immunologicznych ograniczonym do miejsc replikacji wirusa, ale myszy pozbawione ICAM-1 (3 odpowiadały mniejszą liczbą komórek odpornościowych, zwłaszcza neutrofilami i limfocytami (Figura 1, b i c). Ten fenotypowy wzór jest zgodny z wynikami in vitro, tj. W monowarstwie komórek nabłonkowych dróg oddechowych, gdzie ekspresja genu ICAM-1 jest indukowana przez infekcję paramyksowirusową i jest wymagana do adhezji i transmigracji leukocytów (28, 29, 36, 37, 47). Te wyniki są również zgodne z dowodem zmniejszonego stanu zapalnego po utracie ICAM-1 w kilku innych modelach, w tym prowokacji alergenem (48). Jednak inni zgłaszają niewielką zmianę w napływie neutrofili indukowaną przez Streptococcus pneumoniae lub Klebsiella pneumoniae (49, 50), być może odzwierciedlając alternatywne mechanizmy rekrutacji i / lub aktywacji komórek immunologicznych w odpowiedzi na infekcję bakteryjną w płucach. Figura Niedobór ICAM-1 chroni przed zapaleniem indukowanym przez wirusy. Myszy typu dzikiego (+ / +) i ICAM-1 (null (A / p) zaszczepiono SeV (5000 EID50) i analizowano w następujący sposób. Skrawki płuc wybarwiono immunologicznie przeciwciałem anty-ICAM-1 (a) lub anty-SeV (b) i wybarwiono kontrastowo hematoksyliną we wskazane dni po szczepieniu. Reprezentatywne fotomikrografie są pokazane dla każdego genotypu (cztery myszy / genotyp). Myszy typu dzikiego zaszczepione PBS lub SeV-UV wykazały wybrzuszenie, ale nie przewodzili wybarwienia nabłonka dróg oddechowych dla ICAM-1, a inkubacja tkanki płucnej z kontrolną nieimmunologiczną IgG nie dawała sygnału powyżej tła w żadnym z genotypów (dane nie pokazane). Podobnie, myszy pozbawione ICAM-1 (3 nie wykazywały wykrywalnego barwienia ICAM-1 powyżej tła (dane nie pokazane). Bar, 20 m. (c) Płyn po płukaniu oskrzelowo-pęcherzykowym poddano całkowitej i różnicowej liczbie komórek. Wartości reprezentują średnią. SEM dla czterech myszy. Dla a c, wartości uzyskane z + / + i. /. kohorty inokulowane PBS lub dezaktywowanym UV SeV nie różniły się od wartości przed podaniem (dane nie pokazane). * Znaczący spadek w porównaniu z kohortą typu dzikiego. Stłumiona reakcja zapalna u myszy pozbawionych ICAM-1. N była korzystna dla gospodarza, ponieważ ta kohorta doświadczała mniejszej utraty masy ciała po zapaleniu oskrzelików (Figura 2a) i niższych wskaźnikach śmiertelności po odoskrzelowym zapaleniu płuc (niepokazane dane). Ponadto, zmniejszenie zapalenia dróg oddechowych nie wydawało się przeszkadzać w obronie gospodarza, ponieważ początkowa szybkość zakażenia wirusowego i następujący po nim klirens nie były znacząco zmienione u myszy kontrolnych ICAM-1. Null versus myszy typu dzikiego (Figura 2, bd). Wyprzedzenie w ciągu 12. 21 dni po zakażeniu SeV jest zgodne z wcześniejszymi doniesieniami, które oceniają miano wirusa przez miareczkowanie punktu końcowego w zarodkowych jajach kurzych (51-53), ale obecne dane z zastosowaniem RT-PCR w czasie rzeczywistym dostarczają również dowodów przeciwko utrzymywaniu się genomu wirusa w tkance gospodarza jako zmutowane quasispecies wirusa (54). Figura 2 Niedobór ICAM-1 chroni przed utratą wagi po infekcji wirusowej bez zmiany klirensu wirusa. Myszy typu dzikiego i myszy bez ICAM-1 zerowano inokulacją SeV (5000 EID50) i analizowano w następujący sposób. (a) Masy ciała w stosunku do wartości początkowych zostały określone jako średnie. SEM ośmiu myszy. * Znaczący wzrost w porównaniu z kohortą typu dzikiego. (b) Płuca poddawano analizie Western blot przeciwko Ab anty SeV, a prążki odpowiadające białku nukleokapsydu SeV (NP) i kontroli Sp1 oznaczano ilościowo przez densytometrię jako średnią. SEM trzech myszy. (c i d) Płuca badano również pod kątem jednostek SeV tworzących łysinki (c) i liczby kopii SeV (d). Wartości dla wirusowych jednostek tworzących łysinki i liczby kopii wirusowego RNA stanowią średnią. SEM dla g tkanki płucnej i 100 ng całkowitego RNA płuca, odpowiednio (trzy myszy / genotyp). Numer kopii wirusowego RNA określono metodą RT-PCR w czasie rzeczywistym dla białka nukleokapsydu SeV i skorygowano pod kątem kontroli GAPDH. Dla ad wartości uzyskane z + / + i. /. kohorty inokulowane PBS lub dezaktywowanym UV SeV nie różniły się od wartości przed podaniem (dane nie pokazane). Myszy pozbawione ICAM-1 (3 są chronione przed ostrą, ale nie przewlekłą nadreaktywnością dróg oddechowych po zapaleniu oskrzelików typu SeV
[więcej w: toksyczni rodzice chomikuj, taksidi club, galareta wieprzowa kalorie ]
[patrz też: protruzja krążka, hydrokolonoterapia warszawa, hydrokolonoterapia poznań ]