Wirusowa indukcja fenotypu przewlekłej astmy i segregacja genetyczna z ostrej odpowiedzi ad

Istotne dla astmy infekcje paramyksowirusowe są najczęstszą przyczyną chorób dolnych dróg oddechowych u niemowląt i małych dzieci (32, 33), a dzieci z klinicznie znaczącym wirusowym zapaleniem oskrzelików wydają się być oznakowane na późniejszy rozwój przewlekłej choroby świszczącej, która jest niezależna od alergia (34). Przypuszczalnie infekcja paramyksowiralna wywołuje nienormalną odpowiedź gospodarza, ponieważ paramyksowirusy (i inne wirusy RNA z dróg oddechowych) nie są uważane za utrzymujące się w tkankach dróg oddechowych jako stały bodziec chronicznej choroby układu oddechowego (35). W obu przypadkach (tj. Z przetrwaniem wirusa lub bez niego) nadal należy określić rolę swoistych czynników gospodarza w rozwoju ostrego lub przewlekłego świszczącego oddechu lub trwającej przez całe życie astmy. Aby lepiej zdefiniować czynniki wirusowe i czynniki gospodarza w rozwoju fenotypu astmy, wykorzystaliśmy mysi model paramyksowirusowego zapalenia oskrzelików z ostrą patologią podobną do stanu ludzkiego (31). Zatem mysi wirus paragrypy typu (wirus Sendai, SeV) przy odpowiednim inokulum powoduje zakażenie ograniczone do błony śluzowej dróg oddechowych i zapalenie w znacznym stopniu ograniczone do tkanek okołoprotezowych / bronchiolarnych. Rozumiemy, że hamowanie ostrej reakcji zapalnej można osiągnąć poprzez ukierunkowane zakłócenie genów nabłonkowych dróg oddechowych. Geny te tworzą sieć, która jest bezpośrednio indukowana przez replikację wirusa i jest zdominowana przez zestaw genów odpowiadających na IFN (27, 29, 31). Wśród potencjalnych genów, które mogą pośredniczyć w ruchu komórek układu odpornościowego, ICAM-1 jest dominującym wyznacznikiem adhezji komórek odpornościowych (szczególnie komórek T) do komórek nabłonka in vitro (28, 36, 37). Rzeczywiście, w niniejszych doświadczeniach przeprowadzonych in vivo, stwierdziliśmy, że ekspresja ICAM-1 jest indukowana głównie na komórkach nabłonka dróg oddechowych gospodarza przez infekcję wirusową i jest niezbędna dla pełnego rozwoju ostrego zapalenia i współistniejącej hiperreaktywności poviralnej dróg oddechowych. Jednak niespodziewanie odkryliśmy, że pierwotna infekcja wirusowa powoduje utrzymujący się fenotyp astmy (tj. Nadreaktywność dróg oddechowych, hiperplazja komórek kubkowych i wytwarzanie mucyny) pomimo niedoboru ICAM-1 i ten fenotyp utrzymuje się pomimo klirensu wirusa. Ten fenotyp jest także indukowalny przez prowokację alergenem, ale w tym przypadku fenotyp ustępuje spontanicznie wraz z upływem czasu. W kontekście wcześniejszych danych, ustalenia ustalają zdolność pojedynczej infekcji paramyksowiralnej do wywoływania zarówno ostrych jak i przewlekłych objawów fenotypu w przypadku choroby z nadmiernym wydzielaniem dróg oddechowych i określają znaczenie specyficznych genów obronnych gospodarza w łagodzeniu ostrego, ale niekoniecznie przewlekłego fenotyp. Ponadto, wyniki dostarczają początkowych dowodów na zdolność nienowotworowych rybowirusów (tj. Paramyksowirusa) do nieodwracalnego przeprogramowania zachowania komórki gospodarza w sposób uprzednio ograniczony do onkogennych wirusów DNA (38, 39). Te odkrycia podnoszą zatem prawdopodobieństwo, że astma nie tylko przypomina uporczywą odpowiedź antywirusową (30, 31), ale może nawet być spowodowana taką odpowiedzią, a więc zapewnia eksperymentalny związek między infekcją paramyksowirusową w dzieciństwie z późniejszą astmą w dzieciństwie i być może wiek dojrzały. Metody Generowanie i obudowa myszy. Myszy typu dzikiego C57BL / 6J i tego samego szczepu myszy IFN – y uzyskano z The Jackson Laboratory (Bar Harbor, Maine, USA) (40). Same-szczepne myszy ICAM-1 null były hojnym darem od J.-C. Gutierrez-Ramos (Millennium Pharmaceuticals Inc., Cambridge, Massachusetts, USA) bezpośrednio i przez The Jackson Laboratory (41). IFN-. i myszy pozbawione ICAM-1 (3 zerowano krzyżowo z powrotem odpowiednio przez dziewięć i dziesięć pokoleń na szczep C57BL / 6J. Myszy pozbawione ICAM-1 (3 są przerywane w eksonie 4 genu ICAM-1, aby uniknąć generowania alternatywnych splicingowanych izoform, które mogą nadal oddziaływać z antygenem funkcji limfocytu (42). Zatem mAb anty-ICAM-1 3E2 rozpoznaje wszystkie pięć izoform ICAM-1 i nie wykrywa ICAM-1 w tym szczepie (odnośnik 41 i dane nie pokazane). Myszy utrzymywano w warunkach wolnych od patogenów do badania w wieku 7. 9 tygodni. Eksperymentalne manipulacje przeprowadzono w komorze laminarnej klasy II. Myszy Sentinel i myszy doświadczalne kontrolne traktowano identycznie jak myszy inokulowane i nie wykazywały żadnych serologicznych ani histologicznych dowodów ekspozycji na 11 patogenów gryzoni (w tym SeV). Wirusowe zaszczepienie i monitorowanie. Po znieczuleniu ketaminą / ksylazyną myszy zaszczepiono donosowo wskazaną dawką (50% dawka zakaźna jaja, EID50) SeV (szczep Fushimi) lub inaktywowanym UV SeV w 30 ul PBS. Poziom ekspresji wirusa w tkance płucnej monitorowano za pomocą barwienia immunologicznego i analizy Western blot z przeciwciałem anty-SeV (31), testem łysinek wirusowych (43) i ilościowym RT-PCR w czasie rzeczywistym z użyciem fluorogennej kombinacji sondy / primera dla białka białka nukleokapsydu SeV (nukleotydy 519. 587 w GenBank dostęp M30202) zgodnie z protokołem producenta (PE Biosystems, Foster City, Kalifornia, USA)
[hasła pokrewne: staw ramienno promieniowy, bromatologia i chemia toksykologiczna, orbitrek efekty po miesiącu ]
[przypisy: szpital psychiatryczny toszek, komornik beata rusin, beata rusin komornik ]