Uraz zwiększa funkcję TLR2 i ekspresję peptydów przeciwdrobnoustrojowych poprzez mechanizm zależny od witaminy D ad 9

Pierwotne keratynocyty stymulowano 1,25D3 (100 nM) lub nośnikiem przez 24 godziny, a następnie lizowano w lodowatym buforze do lizy (1% Triton-X w PBS zawierającym inhibitory proteinazy). Po odwirowaniu, równe ilości białka zmieszano z buforem ładującym (0,25 M Tris HCl, 10% SDS, 10% glicerol i 5% P-merkaptoetanol) i naniesiono na 10% żel Tris-Tricine (ISC Bioexpress). Po rozdzieleniu białka zostały przeniesione na membranę PVDF (Millipore) i zablokowane w 5% mleku (Bio-Rad) w TBS zawierającym 0,1% Tween20 przez godzinę w temperaturze pokojowej. Po płukaniu w TBS zawierającym 0,1% Tween20, błony barwiono króliczym poliklonalnym anty-CD14 (Abcam) lub przeciwciałem anty-TLR2 (eBioscience), ponownie płukano w TBS zawierającym 0,1% Tween20 i reprobowano kozim anty-sprzężonym z HRP przeciwciało w postaci krążka (Dako). Zaplamione białko wizualizowano przy użyciu systemu Western Lightning (PerkinElmer) i określano ilościowo przy użyciu oprogramowania ImageJ w wersji 1.36b (http://rsb.info.nih.gov/ij/). Ploty były reprobowane przeciwciałem anty-tubulinowym (Abcam), aby zapewnić równe ładowanie białka. Przeprowadzono analizy z 3 niezależnych eksperymentów. Statystyka. Różnice między grupami porównano za pomocą testu dwustronnego ucznia lub testu Manna-Whitneya, jak wskazano w legendach figur. Wartość AP mniejsza niż 0,05 została uznana za znaczącą. Materiały uzupełniające Zobacz Uzupełniające dane Podziękowania Ta praca była wspierana przez nagrodę VA Merit, a NIH udziela NIH / NIAID HHSN26620040029C, umowa ADB nr. N01-AI-40029AI48176, AI052453 i AR45676 na rzecz RL Gallo, przez przyznanie BU 2212 / 1-1 z Deutsche Forschungsgemeinschaft do AS Büchau, a także przez przyznanie BMBF-LPD 9901 / 8-119 z Deutsche Akademie der Naturforscher Leopoldina na J Schauber. Przypisy Niestandardowe skróty: AMP, peptyd przeciwdrobnoustrojowy; Ct, cykl progowy; CYP24A1, 24-hydroksylaza; CYP27B1, 1,25D3, 1,25 (OH) 2 witamina D3; 25D3, 25OH witamina D3; a-hydroksylaza; qPCR, ilościowy RT-PCR w czasie rzeczywistym; VDR, receptor witaminy D; VDRE, element reagujący na witaminę D. Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Informacje referencyjne: J. Clin. Invest.117: 803. 811 (2007). doi: 10.1172 / JCI30142
[patrz też: galareta wieprzowa kalorie, kromed grybów, klinika bocian białystok ]
[patrz też: helides cena, kromed grybów, fenistil ulotka ]