Uraz zwiększa funkcję TLR2 i ekspresję peptydów przeciwdrobnoustrojowych poprzez mechanizm zależny od witaminy D ad 7

Aktywowana witamina D3 wytwarzana w procesie gojenia inicjuje odpowiedź przeciwdrobnoustrojową i zwiększa wrażliwość na prowokację drobnoustrojami. Receptory rozpoznawcze TLR2 i CD14 indukowane przez 1,25D3 są ważne dla obrony przed szerokim zakresem flory związanej z infekcjami ran, ponieważ rozpoznają one elementy infekcji zarówno Gram-ujemnych, jak i Gram-dodatnich, takich jak peptydoglikan i kwas lipotejchojowy (19 ), a heterodimery TLR2 z TLR1 i TLR6 wykrywają odpowiednio triacetylowane i diacetylowane lipopeptydy (33,34). Ponadto, TLR2 / 6 rozpoznaje składniki ściany grzybów i mykoplazm. Jest to zgodne z obserwacjami klinicznymi, że duża część ostrych ran wykazuje kolonizację grzybową, ale nie wykazuje jawnych objawów infekcji grzybiczej (35), a katelicydyna jest grzybobójcza (36). Ważne będzie zbadanie, czy zaburzony metabolizm witaminy D3 po urazie przyczynia się do nieprawidłowej naprawy lub zakażenia rany, czy też inne zaburzenia charakteryzujące się zmienionymi wrodzonymi odpowiedziami immunologicznymi mogą odnieść korzyść z modyfikacji metabolizmu witaminy D3 w skórze. Zobacz też odziej sieMetody Pacjenci i leczenie. Aby zbadać rany skóry ludzkiej, 5-milimetrowe rany pełnej grubości indukowano u ochotników (n = 5) w warunkach aseptycznych w znieczuleniu miejscowym, jak opisano poprzednio (18). Po 24 godzinach od nacięcia pobrano 4-mm wycinane biopsje z miejsca uszkodzenia i natychmiast utrwalono w formalinie w celu barwienia immunologicznego lub zamrożono w ciekłym N2 w celu późniejszej izolacji RNA. Nienaruszona skóra od zdrowych ochotników służyła jako kontrola (n = 4). W celu zbadania wpływu miejscowego 1,25D3 zdrową skórę ochotników (n = 7) traktowano raz miejscowo miejscowo 1,25D3 (1,0 mM) i pozostawiono pod przykryciem przez 4 dni. Poddana działaniu pojazdu przeciwległa skóra posłużyła jako kontrola. Po leczeniu, biopsje skóry uzyskano z obu miejsc, utrwalono w 10% formalinie i zatopiono w parafinie do barwienia immunologicznego. Wszystkie zabiegi i pobrane próbki, w tym biopsje skóry, zostały zatwierdzone przez komisje do badań z udziałem ludzi z University of California, San Diego i University of Michigan. W przypadku wszystkich procedur uzyskano świadomą zgodę. Badania na zwierzętach. Rany skóry pobierano od myszy z niedoborem CYP27B1 (37) lub ich rodzeństwa z miotu typu dzikiego (n = 5 na grupę) 24 godziny po indukcji rany o całkowitej grubości 5 mm w warunkach aseptycznych. Nieuszkodzona skóra z tego samego zwierzęcia służyła jako kontrola. Próbki skóry natychmiast zamrożono w celu późniejszej izolacji RNA. Wszystkie protokoły użyte w badaniach zostały zatwierdzone przez komisje do badań z udziałem zwierząt w Weteranów Sprawy Medyczne Centrum, San Francisco i University of California, San Diego. Kultura komórkowa i bodźce. Ludzkie keratynocyty hodowano w pożywce do hodowli komórek EpiLife bez surowicy (Cascade Biologics) zawierającej 0,06 mM Ca2 + i x EpiLife Defined Suplement Wzrostu (EDGS) w 37 ° C w standardowych warunkach hodowli tkankowej. Hodowle podstawowe utrzymywano do 5 pasaży w tych pożywkach z dodatkiem 50 U / ml penicyliny i 50 | ig / ml streptomycyny. Keratynocyty HaCaT hodowano w DMEM (Sigma-Aldrich) z 10% FCS. Komórki w konfluencji 50%. 70% stymulowano w świeżej po inkubacji wstępnej z 1,25D3 (0,1. 100 nM przez 4. 24 godziny, Sigma-Aldrich). Alternatywnie, normalne ludzkie naskórkowe keratynocyty stymulowano w obecności 1,25D3 (0,1. 100 nM). Bodźce zawierały ligandy TLR2 / 6 Malp-2 (0,001. 0,5. G / ml, Alexis Biochemicals), FSL-1 (Pam2Cys-GDPKHPKSF, 1. 2. G / ml, Invivogen) i zymosan (50. G / ml; Invivogen), jak również flagelina (50 ng / ml, Alexis Biochemicals), LPS (1 .g / ml, Sigma-Aldrich), kwas lipotejchojowy (10 .g / ml, Sigma-Aldrich), lipopeptyd 19-kDa (10. g / ml, miły prezent od S. Krutzik, UCLA, Los Angeles, Kalifornia, USA), DNA CpG (10 .g / ml, Sigma-Aldrich), Ca2 + (1,7 .M), LPS (1 .g / ml; Sigma-Aldrich), TNF-a (20 ng / ml, Chemicon International) i TGF-a (0,1 (1 ng / ml; R & D Systems). Przeciwciało blokujące TLR2 (klon TL2.1, 5 .g / ml, eBioscience) zastosowano w celu zbadania roli sygnalizacji TLR2. Ponadto, keratynocyty traktowano wstępnie 10 ~ 7 M antagonisty VDR ZK159222 lub inhibitora CYP itrakonazolu przed stymulacją TGF-P1 w obecności 25D3 (10 nM, Sigma-Aldrich). Kultura organotypowa. Naskórkowe ludzkie konstrukty tkanek przypominających skórę uzyskano z MatTek Corp. i hodowano zgodnie z instrukcjami producenta. Konstrukty skórne hodowano w pożywkach podtrzymujących (EPI-100-MM, MatTek Corp.) i stymulowano Malp-2 (0,1 ug / ml) przez 24 godziny w obecności 1,25D3 (100 nM)
[podobne: orbitrek efekty po miesiącu, 6 filarów poczucia własnej wartości pdf, odziejsie ]
[podobne: remigiusz wierzgoń wikipedia, odziejsie, multimed zamość ]