Środek obrazujący PET do oceny ekspresji PARP-1 w raku jajnika cd

Immunofluorescencja komórek UWB1.289 PARP1-KO i UWB1.289 potraktowanych olaparibem z UWB1.289 przywróconych do wartości BRCA1 nie wykazywało wzrostu poziomu H2HPa w porównaniu z kontrolami DMSO. Komórki OVCAR8 PARP1-KO G1 i G3 traktowane przez Olaparib wykazywały 1,3-krotny wzrost (ANOVA, ** P <0,01 i *** P <0,001), odpowiednio, w. H2AX z kontroli DMSO. Stanowiło to przeciwieństwo do komórek UWB1.289 i OVCAR8 traktowanych olaparibem, które wykazały 2,6-krotny (ANOVA, **** P <0,0001) i 2,2-krotny (ANOVA, **** P <0,0001) wzrost. H2AX z DMSO sterownica. (E) Testy żywotności komórek wykazały, że komórki PARP1-KO były jednakowo oporne na olaparib w porównaniu z komórkami przywróconymi BRCA1, a wszystkie kliniczne inhibitory PARP wymagały PARP-1 dla maksymalnej skuteczności. Utrata PARP1 spowodowała największą zmianę w skuteczności niraparibu i talazoparibu. Czułość cisplatyny była stosowana jako kontrola pozytywna i pozostała niezmieniona po utracie PARP1. Wszystkie eksperymenty in vitro zostały zakończone 3 niezależne czasy. Linie komórkowe pokazane w A. D, od lewej do prawej, to: UWB1.289, UWB1.289 Przywrócono BRCA1, UWB1.289 PARP1-KO G1, UWB1.289 PARP1-KO G2, UWB1.289 PARP1-KO G3, OVCAR8 OVCAR8 PARP1-KO G1, OVCAR8 PARP1-KO G2 i OVCAR8 PARP1-KO G3. A, mutant BRCA1. +, Przywrócono BRCA1. [125I] Wiązanie radioliganda KX1 mierzy różnice w ekspresji PARP-1. Stosując linie komórkowe PARP1-KO wraz z kilkoma niezmodyfikowanymi liniami komórkowymi EOC, wykazaliśmy znaczące różnice w wiązaniu radioliganda [125I] KX1 w stosunku do ekspresji PARP-1 (Figura 1C, Suplementowa Figura 2C i Tabela Uzupełniająca 2). Przede wszystkim, delecja PARP1 zmniejszyła wiązanie radioliganda [125I] KX1 w obu modelach. Ponadto zaobserwowaliśmy, że wiązanie radioliganda [125I] KX1 było zmniejszone w komórkach funkcjonalnych BRCA względem dysfunkcyjnych (Figura 1C, dodatkowa Figura 2C i Tabela Uzupełniająca 2). Przywrócenie BRCA1 w komórkach UWB1.289 skutkowało niższym wiązaniem radioliganda i odpowiadało niższej ekspresji PARP-1 przez IF i Western blot (Figura 1, ACH i Suplementowa Figura 2, ACH). Te dane wspierają wiązanie radioliganda in vitro z [125I] KX1 jako metodą do badania ekspresji PARP-1. Utrata PARP1 stępia skuteczność PARPi w liniach komórkowych raka jajnika in vitro. Genetyczna delecja PARP1 powodowała zmniejszenie uszkodzenia DNA i wrażliwości na PARPis in vitro. Najpierw zbadaliśmy izogeniczne komórki UWB1.289 przez IF po leczeniu olaparibem przez 24 godziny. Nie stwierdzono zmian w uszkodzeniach DNA mierzonych przez tworzenie ognisk .H2AX po leczeniu olaparibem zarówno w grupie przywróconej BRCA1, jak i komórkach PARP1-KO w porównaniu z kontrolami DMSO. Przeciwnie, poziomy. H2AX wzrosły 2,6 razy w komórkach UWB1.289 traktowanych olaparibem w porównaniu z kontrolami DMSO (Figura 1D). Podobnie, ten sam efekt zaobserwowano w komórkach OVCAR8 (Figura 1D). Następnie, cytotoksyczność oceniana dla klinicznie stosowanego PARPis wykazała, że utrata PARP1 dała taką samą lub większą oporność w porównaniu z przywracaniem BRCA1 w komórkach UWB1.289 (Figura 1E, dodatkowa figura 2D i dodatkowa tabela 3, A i B). Co znamienne, zaobserwowano większą oporność w komórkach PARP1-KO w porównaniu z komórkami przywróconymi do BRCA1 z kontroli rodzicielskich dla silnych traperów PARP, niraparibu i talazoparibu. Utrata PARP1 spowodowała ponad 1000-krotny spadek wrażliwości na talazoparib, podczas gdy przywrócenie BRCA1 miało mniejszy wpływ na komórki UWB1.289. Komórki OVCAR8 stały się również oporne na PARPIS po utracie PARP1. Nie obserwowano różnic w czułości na cisplatynę w liniach komórkowych po utracie PARP1, co wskazuje na brak ogólnej wrażliwości na leki uszkadzające DNA. Dane te zapewniają bezpośrednie wsparcie dla ekspresji PARP-1 jako wymogu wrażliwości PARPi in vitro. Przedkliniczne obrazowanie ekspresji PARP-1. Powyższe wyniki wskazują na potrzebę dynamicznego, nieinwazyjnego i ilościowego monitorowania ekspresji PARP-1 u pacjentów wybranych do terapii inhibitorami PARP. W tym celu przeprowadzono badania dowodów na koncepcję przedklinicznych modeli heteroprzeszczepu mysiego pacjenta (PDX), aby potwierdzić badania wiązania radioliganda in vitro i wykazać swoistość [18F] FTT do ilościowego obrazowania PARP-1 in vivo. Istotne różnice zaobserwowano w wychwycie radioznacznika w guzach przed i po leczeniu olaparibem. Podając olaparib (50 mg / kg) zaobserwowaliśmy zmniejszenie stosunku guza [18F] FTT do mięśni, półilościową miarę wiązania znacznika in vivo (Figura 2A i Suplementowa Figura 3A). Dodatkowo, do potwierdzenia wyników mikroPET wykorzystano tkankę nowotworową od myszy nieleczonych i leczonych olaparibem za pomocą autoradiografii ex vivo (Figura 2B i dodatkowa Figura 3B).
[więcej w: mazak gostyń, komornik sądowy beata rusin, wyparzanie słoików w piekarniku ]
[hasła pokrewne: odziejsie, multimed zamość, ziaja dermatologiczna baza z tlenkiem cynku ]