Środek obrazujący PET do oceny ekspresji PARP-1 w raku jajnika ad

Wszystkie te badania wskazują, że istnieje zapotrzebowanie na technologię biomarkerów zdolną do ilościowej oceny PARP-1 in vivo, która mogłaby umożliwić wybór pacjenta do terapii PARPi. Obecne metody określania ekspresji PARP-1 w klinicznych okazach nowotworowych są ograniczone i oparte na metodach immunohistologicznych, które wymagają inwazyjnych procedur, takich jak biopsja lub operacja. Badania asocjacyjne ekspresji PARP-1 przez IHC z rokowaniem i wynikami wykazały mieszane wyniki, sugerując niespójność procedur barwienia i przeciwciał (25-28). W rzeczywistości brak jest zatwierdzonego protokołu barwienia IHC dla PARP-1, który może być szeroko i rzetelnie stosowany w praktyce klinicznej (28). Ponadto podejścia oparte na pobieraniu próbek tkanek nieadekwatnie oceniają potencjalną heterogenność ekspresji PARP-1 w rozsianym eOC, stadium choroby wysoce istotnej dla terapii PARPi. Technologia radiotracerów do nieinwazyjnego obrazowania PARP-1 mogłaby teoretycznie pokonać ograniczenia IHC poprzez ilościową ocenę globalnej ekspresji PARP-1 w pierwotnej i rozsianej chorobie (31, 32). [18F] FluorThanatrace ([18F] FTT) jest znakowanym radioaktywnie małocząsteczkowym PARPi, który jest obecnie zatwierdzony do użytku klinicznego w ramach nowego badania aplikacji leku na University of Pennsylvania (Philadelphia Pennsylvania, USA) i Washington University (St. Louis, Missouri , USA) (33,34). [18F] Wykazano, że FTT i jego jodowany analog [125I] KX1 korelują z ekspresją PARP-1 poprzez efekt receptor-ligand, który wynika z ich głównego farmakologicznego mechanizmu działania (16, 35). Jako takie, [18F] FTT i [125I] KX1 określają ilościowo ekspresję PARP-1 i mają zdolność do pomiaru związku docelowego leku klinicznych PARP, konkurując ze sobą o kieszeń wiążącą NAD + na katalitycznej poddomenie PARP-1. W przeciwieństwie do aktualnych metodologii, które mierzą biochemiczny produkt PARP-1, poli (ADP-rybozy) (PAR), jest to bezpośredni pomiar zaangażowania leku w cel. W pracy tej potwierdzamy przedkliniczne uzasadnienie pomiaru ekspresji PARP-1 jako prognostycznego biomarkera odpowiedzi na PARPIS i podajemy pierwsze badanie kliniczne badające ekspresję PARP-1 za pomocą [18F] FTT PET w EOC. Wyniki CRISPR / Cas9 delecji PARP1 w komórkach raka jajnika. Przy użyciu edycji genu CRISPR / Cas9 pośredniczyliśmy w delecji PARP1 w 2 liniach komórkowych raka jajnika, jednej z mutacją BRCA1 i innej z metylacją promotora BRCA1 (UWB1.289 i OVCAR8). Stwierdzono wcześniej, że komórki OVCAR8 mają obniżoną ekspresję BRCA-1 przypisywaną metylacji promotora i są wrażliwe na środki uszkadzające DNA (36. 38). Uderzająco, genetyczna delecja PARP1 w komórkach EOC z mutacją BRCA1 lub metylacją promotora BRCA1 nie spowodowała syntetycznej letalności, ponieważ komórki były żywe i wzrastały w hodowli (21, 39). Identyfikacja mechanizmu rentowności wykracza poza zakres tej pracy, ale jest kontynuowana. Stosując ten system do delecji PARP1, uzyskaliśmy ponad 90% redukcję ekspresji PARP-1 w poliklonalnych populacjach mutanta BRCA1 (UWB1.289) i metylowanych BRCA1 (OVCAR8) komórek raka jajnika mierzonych immunofluorescencją (IF) i analizą Western blot (Rysunek 1, A i B oraz Dodatek Rysunek 1, A i B; materiał uzupełniający dostępny online w tym artykule; https://doi.org/10.1172/JCI97992DS1). Badania w mikroskopie komórkowym wykazały, że PARP-1 był rzeczywiście nieobecny na poziomie pojedynczej komórki w populacjach poliklonalnych (Figura 1A i Suplementowa Figura 1A). Przebadaliśmy również ekspresję PARP-2 i PARP-3 metodą blottingu Western w celu zbadania efektów niedocelowych pojedynczego przewodnika RNA. Nie stwierdzono różnic w kontrolowaniu ekspresji PARP-2 lub PARP-3 za pomocą analizy Western blot (dodatkowa figura 1B). Wreszcie, w celu określenia, czy ekspresja PARP-1 zmienia się w liniach komórek jajnika z dysfunkcją BRCA i bez niej (Tabela 1), zmierzono PARP-1 w wielu liniach komórkowych i wykazano dynamiczny zakres ekspresji (dodatkowa Figura 2, A i B, i dodatkowa tabela 2). Figura Charakterystyka linii komórkowych raka jajnika PARP1-KO i ocena in vitro skuteczności inhibitora PARP. (A) Immunofluorescencja wykazała, że PARP-1 była nieobecna w więcej niż 90% pojedynczych komórek w populacjach poliklonalnych PARP1-KO (ANOVA, **** P <0,0001) i była obniżona w komórkach przywróconych do BRCA1 w porównaniu z kontrolą rodzicielską (ANOVA, **** P <0,0001). (B) Populacje poliklonalne linii komórkowych PARP1-KO obniżały PARP-1 za pomocą Western blot w porównaniu z kontrolą rodzicielską. (C) [125I] Testy wiązania radioliganda KX1 wykazały znaczącą redukcję wiązania promieniotwórczego w liniach komórkowych przywróconych do KRCA PARP1-KO i UWB1.289 w porównaniu z kontrolą rodzicielską (ANOVA, P <0,0001). [patrz też: sanatorium krystyna busko, galareta wieprzowa kalorie, klinika bocian białystok ] [więcej w: raven market, engerix b cena, remigiusz wierzgoń wikipedia ]