Środek obrazujący PET do oceny ekspresji PARP-1 w raku jajnika ad 8

Procedury eksperymentalne zostały przyjęte z poprzednich prac. Cisplatynę badano także jako kontrolę w celu oceny zmian wrażliwości czynników uszkadzających DNA, które występują po utracie PARP1. Żywotność komórek oceniano za pomocą CellTiterGlo (Promega). Eksperymenty zakończono w dwóch niezależnych czasach. Przedkliniczne obrazowanie mikrotomowe PARP-1. Dzięki seryjnym badaniom obrazowym PET [18F] FTT, oceniliśmy zaangażowanie docelowe leku w PARP-1 za pomocą zatwierdzonego przez FDA olaparibu PARPi. Obrazowanie PET zaangażowania w cel leku PARP-1 jest nieinwazyjną metodologią bezpośrednią do oceny hamowania PARP. Przy użyciu 2 modeli heteroprzeszczepu uzyskanych od pacjenta z rakiem jajnika u 15 do 18-tygodniowych samic myszy NOD SCID dostarczonych z laboratorium Simpkinsa na University of Pennsylvania (48), w tym mutanta BRCA1 i WT, wykonano obrazowanie mikropunktowe na filtrze Phillips Skaner systemów medycznych (n = 4 myszy). Myszy zobrazowano w dniu 1, a następnie olaparib podawano doustnie codziennie przez zgłębnik w dawce 50 mg / kg. Myszy były ponownie odtwarzane w 4 dniu, godzinę po czwartej dawce olaparibu. W sumie 4 dawki olaparibu podawano między badaniami obrazowymi w celu uzyskania stanu stacjonarnego. Badania autoradiografii ex vivo przeprowadzono na myszach z modelu PDX WO-12-2 zi bez leczenia olaparibem (n = 6). Różnice w stosunkach nowotworu do mięśni zostały zmierzone i były reprezentatywne dla odsetka zaangażowania leku w lek PARPi. Immunohistochemia PARP-1 i autoradiografia na próbkach klinicznych. Przeprowadzono immunohistochemię kolorymetrii w University of Pennsylvania Pathology Core dla H & E i biomarkerów, w tym PARP-1, A H2AX, p53, LCA i AE1 / 3. Te biomarkery wybrano ze względu na ich znaczenie dla EOC. AE1 / 3 jest keratynowym markerem i został wykorzystany do identyfikacji komórek nowotworowych przez c-IHC. W celu określenia, gdzie w mikrośrodowisku nowotworu PARP-1 została wyrażona, nałożyliśmy koszt LCA, który jest markerem limfocytów. Ponadto przeanalizowaliśmy wspólne biomarkery obecne w wysokowartościowym surowiczym EOC, w tym p53 i . H2AX. Wreszcie, PARP-1 oceniano autoradiografią f-IHC i [125I] KX1 na sąsiednich odcinkach w celu ustalenia, czy dwie metody kolokalizują. Obraz kliniczny [18F] FTT PET. Badanie kliniczne obejmowało 2 kohorty obrazujące: kohortę biodystrybucji i kohortę dynamiczną. Pacjenci włączeni do tego badania z patologicznymi korelatami byli zapisani do dynamicznej kohorty. Jako taki, tylko ten protokół jest zgłaszany w tej sekcji. Skanowanie dynamiczne przeprowadzono przez około 60 minut od momentu wstrzyknięcia z polem widzenia na brzuch / miednicę lub w celu włączenia znanego miejsca zajęcia nowotworu. Statyczne obrazy od podstawy czaszki do połowy uda wykonano rozpoczynając około 90 i 180 minut po wstrzyknięciu [18F] FTT; te statyczne skany były opcjonalne według uznania badacza lub lekarza prowadzącego badania. W analizie wykorzystano statyczne obrazy uzyskane w około 90 minut. [18F] Obrazowanie PET / CT FTT przeprowadzono na skanerze PET / CT Phillips Ingenuity (Phillips Medical Systems). Obrazy zostały zrekonstruowane przy użyciu standardowych technik rekonstrukcji i zinterpretowane przez przeszkolonych czytelników radiologii. Zmiany chorobowe były najpierw zlokalizowane na równoczesnym klinicznym [18F] FDG PET / CT, a następnie zlokalizowane na [18F] FTT PET / CT. Maksymalny SUV został zarejestrowany dla każdego skanu. Statystyka. Przedstawione dane są średnie. SEM, o ile nie zaznaczono inaczej. Wszystkie wykresy zostały wyprodukowane i statystycznie przeanalizowane przy użyciu Prism w wersji 6.0, GraphPad. Maksymalna liczba miejsc wiązania PARP (Bmax) została obliczona przez wykładniczą, nieliniową krzywą funkcji dopasowania hiperboli wiążącej 1-miejsce. Wszystkie testy statystyczne porównujące średnią z dwóch grup były dwustronne. Porównania średnich z więcej niż 2 grup przeprowadzono stosując jednokierunkową zwykłą ANOVA. Krzywe odpowiedzi na dawkę dopasowano stosując nieliniową sigmoidalną krzywą dawka-odpowiedź i obliczono skuteczne obliczenia dla 50% zmniejszenia żywotności komórek. Analizę obrazu przeprowadzono przy użyciu oprogramowania PMOD i obliczono stosunki guza do mięśni. Przedkliniczne badania obrazowe microPET, porównujące wychwyt nowotworu przez radioznacznik, analizowano za pomocą sparowanego, 2-ogonka testu t. Badania autoradiograficzne analizowano przy użyciu niesparowanego dwustronnego testu t. Wybraliśmy. 0,05 (95% przedział ufności), a dane uznano za istotne, jeśli P <0,05. Dla korelacji obliczono współczynnik korelacji Pearsona i dane uznano za statystycznie istotne, jeśli P <0,05. W celu określenia zdolności SUV [18F] FTT PET do przewidywania ekspresji PARP-1 mierzonej za pomocą f-IHC, zastosowano regresję liniową i wyniki uznano za statystycznie istotne, jeśli różniły się od zera. Zatwierdzenie badania [przypisy: mąka ziemniaczana jako puder, ubezpieczenie nfz za granicą, toksyczni rodzice chomikuj ] [więcej w: protruzja krążka, hydrokolonoterapia warszawa, hydrokolonoterapia poznań ]