Selektywny inhibitor osteoklastycznej V-H + -ATPazy zapobiega utracie masy kostnej zarówno u szczurów wyciętych tarczycy, jak i po wycięciu jajników

Silny i selektywny inhibitor osteoklastycznej V-H + -ATPazy, (2Z, 4E) -5- (5,6-dichloro-2-indolilo) -2-metoksy-N- (1,2,2,6,6 -pentametylopiperydyn-4-ylo) -2,4-pentadienamid (SB 242784), oceniano w dwóch zwierzęcych modelach resorpcji kości. SB 242784 całkowicie zapobiegał hiperkalcemii wywołanej retinoidami u szczurów po teście tarczycy (TPTX) przy podawaniu doustnym w dawce 10 mg / kg. SB 242784 był wysoce skuteczny w zapobieganiu wywoływanej przez jajników utracie kości u szczura, gdy był podawany doustnie przez 6 miesięcy w dawce 10 mg / kg / dzień i był częściowo skuteczny w dawce 5 mg / kg / dobę. Jego aktywność wykazano przez pomiar gęstości mineralnej kości (BMD), biochemicznych markerów resorpcji kości i histomorfometrii. SB 242784 był co najmniej tak samo skuteczny w zapobieganiu utracie masy kostnej, co optymalna dawka estrogenu. Nie zaobserwowano niepożądanych skutków podawania związku ani wpływu na czynność nerek ani kwasowość moczu. Selektywność inhibitora była dalej badana przy użyciu testu cytochemicznego in situ dla V-H + -ATPazy wrażliwej na bafilomycynę z użyciem skrawków osteoklastoma i wielu innych tkanek. SB 242784 hamował enzym osteoklastów przy 1000-krotnie niższych stężeniach niż enzymy w którejkolwiek z ocenianych innych tkanek. SB 242784 demonstruje użyteczność selektywnego hamowania V-H + -ATPazy osteoklastu jako nowatorskiego podejścia do zapobiegania utracie masy kostnej u ludzi. Wprowadzenie Inhibitory resorpcji kości mogą zachować masę kostną i utrzymać prawidłową budowę kości, zapobiegając w ten sposób złamaniom w późniejszym życiu (1). Proces resorpcji kości wymaga wydzielania protonów przez osteoklasty (2). Pozwala to na rozpuszczenie minerału kostnego i utrzymanie kwaśnego środowiska wymaganego przez enzymy proteolityczne do degradacji macierzy kostnej (3). Protony są wytłaczane przez pompę protonową należącą do klasy H + -ATPaz typu wakuolowego (V-H + -ATPazy (4), która jest obecna w wysokim stężeniu na marszczonej granicy (powierzchnia wierzchołkowa) resorbującego osteoklastu. Zatem H + -ATPaza reprezentuje wcześniej niewykorzystany cel molekularny do projektowania nowych środków do zmniejszania aktywności osteoklastów, jednak ponieważ V-H + -ATPaza jest wszechobecnym składnikiem organizmów eukariotycznych i jest główną elektrogeniczną pompą endomembran (5), selektywna hamowanie osteoklastu V-H + -ATPazy musi zostać osiągnięte w celu uzyskania nowych leków, które mogą stanowić użyteczne i bezpieczne środki do leczenia osteoporozy i powiązanych chorób osteopenicznych Bafilomycyna A1, silny i swoisty inhibitor V-H + -ATPazy ( 6), hamuje resorpcję kości zarówno in vitro (7), jak i in vivo (8), jednak ponieważ bafilomycyna nie jest selektywna dla żadnego konkretnego typu V-H + -ATPazy, po podaniu zwierzętom hamuje wszystkie niezbędne V-H + – ATPase prowadzi do systemowej zmiany fizjologii komórki i do niedopuszczalnej toksyczności (9). Niedawno odkryto nową klasę małych cząsteczek obdarzonych silną aktywnością hamującą osteoklast V-H + -ATPazę (10), której optymalizacja zaowocowała (2Z, 4E) -5- (5,6-dichloro-2-indolilem) – 2-metoksy-N- (1,2,2,6,6-pentametylopiperydyn-4-ylo) -2,4-pentadienamid (SB 242784, Figura 1) (11). Rycina Struktura chemiczna SB 242784. Opisano profil hamujący V-H + -ATPazy in vitro SB 242784 (11). SB 242784 był inhibitorem o niskiej nanomolach (IC50 = 26,3 nM) wrażliwej na bafilomycynę (wakuolarnej) Mg2 + -ATPazy w preparatach błonowych osteoklastów otrzymanych z kur niosek. Ponadto SB 242784 był bardzo silnym inhibitorem resorpcji kości (IC50 = 3,4 nM) w teście mierzącym fragmenty kolagenu uwalniane z kawałków kości po 48-godzinnej inkubacji z ludzkimi osteoklastami. W niniejszym artykule scharakteryzujemy dalej biochemiczne i farmakologiczne działania SB 242784 i wykazujemy, że jest wysoce selektywny wobec V-H + -ATPazy ludzkich osteoklastów w porównaniu z V-H + -ATPazami z wielu innych ludzkich tkanek. Co najważniejsze, pokazujemy, że podawanie doustne SB 242784 zmniejsza hiperkalcemię wywołaną przez retinoid u szczurów z TPYT i zapobiega zwiększonej szybkości resorpcji kości i wynikającej z tego utraty tkanki kostnej obserwowanej u szczurów po wycięciu jajników. Co ważne, przy całkowicie aktywnych dawkach terapeutycznych SB 242784 nie ma wpływu na wydalanie kwasu moczowego. Ponieważ V-H + -ATPaza umiejscowiona na błonie komórkowej w nerkach uczestniczy w zakwaszaniu moczu, odkrycie to potwierdza in vivo selektywność SB 242784 zmierzoną in vitro. Metody Test cytochemicznej Mg-ATPazy in situ. Test cytochemiczny opracowany do oznaczania aktywności V-ATPazy w skrawkach tkanek uzyskano z metody opisanej przez Chayena (12)
[podobne: mąka ziemniaczana jako puder, staw ramienno promieniowy, wyparzanie słoików w piekarniku ]
[podobne: supradyn opinie, szpital psychiatryczny toszek, komornik beata rusin ]