Selektywny inhibitor osteoklastycznej V-H + -ATPazy zapobiega utracie masy kostnej zarówno u szczurów wyciętych tarczycy, jak i po wycięciu jajników cd

Po tygodniu aklimatyzacji zwierzęta podzielono losowo na pięć grup po 10 sztuk i umieszczono w osobnych klatkach metabolicznych w celu zebrania 24-godzinnych próbek moczu w celu oznaczenia objętości moczu, pH i całkowitej kwasowości, podstawowej zawartości pirydynoliny (PYD) i dezoksypirydyniny. (DPD). Podczas zbierania, aby uniknąć degradacji mocznika, próbki moczu były utrzymywane w stanie zamrożenia. Oceniano mineralną gęstość kości (BMD) dystalnej kości metafizycznej kości udowej i kręgów lędźwiowych (L3. L6, jako powierzchnię całkowitą). Cztery dni później, w znieczuleniu pentobarbitonem (35 mg / kg dożylnie), zwierzęta poddano obustronnie owariektomii (grupy 1. 4) lub operowano pozornie (grupa 5) (15, 16). Bezpośrednio po zabiegu zwierzęta leczono nośnikiem, estrogenem lub SB 242784. Estrogen (grupa 1) podawano w postaci peletek o powolnym uwalnianiu, zawierających 2,5 mg 173-estradiolu (Innovative Research of America, Sarasota, Floryda, USA); każdemu zwierzęciu wszczepiono podskórnie jedną grudkę, którą zastąpiono po 3 miesiącach. SB 242784 podawano doustnie przez zgłębnik 5 i 10 mg / kg (odpowiednio grupy 2 i 3), a 1% nośnik metocel podawano doustnie zarówno szczurom operowanym z wyciętymi jajnikami, jak i pozorowanym (grupy 4 i 5). Wszystkie zabiegi wykonywano codziennie przez 6 miesięcy. Parametry moczu, oznaczanie PYD i DPD oraz ocena BMD wykonywano co miesiąc przez 6 miesięcy. Masę ciała zwierząt rejestrowano przez cały okres doświadczenia. Procedury analityczne Pomiar BMD. Oznaczenia przeprowadzono za pomocą rentgenowskiego densytometru kości Hologic QDR 1000 Plus (Hologic, Waltham, Massachusetts, USA), z kolimatorem 0,64 mm, i stosując oprogramowanie zaprojektowane specjalnie do pomiaru BMD małych zwierząt in vivo. Wartości BMD wyrażono w gramach na centymetr kwadratowy. Pomiar wydalania z moczem wiązań poprzecznych PYD i DPD. Zgodnie z metodą Eyre (17), próbki moczu 250- | 3 L hydrolizowano za pomocą 12 N HCl w 110 ° C przez 16 godzin. Hydrolizaty rozcieńczono następnie lodowatym kwasem octowym i n-butanolem i naniesiono na kolumny celulozowe CF1 w celu ekstrakcji analitów. Próbki wymywano wodą, odparowywano do sucha w 40 ° C w wyparce wirówkowej (Univapo 100H, UniEquip, Martinsried, Monachium, Niemcy) i odtwarzano w 250 ul 1% kwasu heptafluoromasłowego. Próbkę 50-. L wstrzyknięto do kolumny C18 w odwróconym układzie faz (Supelco Inc., Bellefonte, Pennsylvania, USA) i, po rozdziale izokratycznym, wykryto fluorometrycznie (falowanie wzbudzające o długości fali 250 nm i długości fali 395 nm). Współczynnik zmienności między testami wynosił 12,9% dla PYD i 13,1% dla DPD. Ilości PYD i DPD wyrażono jako nanomole na 24 godziny. Pomiar całkowitej kwasowości w moczu. Wolną kwasowość oceniano przez miareczkowanie próbek moczu za pomocą 0,01 M NaOH o pH 7,4. Zawartość NH4 + określono przez enzymatyczną bioanalizę (Mocznik / Zestaw Amoniaku, Boehringer Mannheim, Mannheim, Niemcy). Całkowitą kwasowość moczu mierzono jako sumę zawartości wolnych kwasów i amonu i wyrażono w ekwiwalentach na litr (N). Histomorfometria Wszystkie zwierzęta otrzymywały dootrzewnowo 10 mg / kg dootrzewnowo, 13 i 4 dni przed sekcją. Próbki kości utrwalono, wybarwiono barwnikiem Villanueva, odwodniono przez zwiększenie stężenia etanolu, odtłuszczono w acetonie i zatopiono w metakrylanie metylu (Polysciences, Inc., Warrington, Pennsylvania, USA). Przekroje podłużne (5 .m), niezdefiniowane, zebrane z trzech płaszczyzn (oddzielonych 100 .m) proksymalnej kości piszczelowej wycięto na mikrotomie Leica (SM2500S). Analiza histomorfometryczna została przeprowadzona przy użyciu Osteomeasure System (OsteoMetrics Inc., Atlanta, Georgia, USA), bez znajomości przydziału grup. Pomiary ograniczono do średniej powierzchni tkanki około 8 mm2, rozpoczynającej się mm poniżej płytki wzrostu nasadowego. Pomiary pierwotne obejmowały obszar kości i szpiku (milimetr kwadratowy), obszar kości (milimetr kwadratowy), obwód kości (milimetr), obwód o pojedynczej etykiecie (sL.PM; mm) i obwód o podwójnej etykiecie (dL.Pm; milimetr) , obwód osteoidalny (O.Pm; milimetr) i obwód erodowany (Er.Pm; milimetr). Wskaźniki pochodne obejmowały objętość kości beleczkowatej (Tb.Ar, procent), liczbę beleczkowatą (Tb.N, liczba na milimetr), grubość beleczkowatą (Tb.Th; mikrometr), separację beleczkową (Tb.Sp; mikrometr), szybkość tworzenia kości z referent powierzchni kości (BFR / BS, sześcienny mikrometr na mikrometr kwadratowy na rok), BFR / BV (referencyjny obszar kości, procent na rok), BFR / TV (referencyjny obszar tkanki, procent na rok), współczynnik przyłożenia minerałów (MAR; mikrometr dziennie) i procent oznaczonego obwodu (L.Pm; procent). Wydalanie z moczem u szczurów obciążonych kwasem Protokół doświadczalny
[przypisy: mąka ziemniaczana jako puder, protruzja krążka, opieka na członka rodziny ]
[przypisy: mazak gostyń, protruzja krążka, hydrokolonoterapia warszawa ]