Selektywny inhibitor osteoklastycznej V-H + -ATPazy zapobiega utracie masy kostnej zarówno u szczurów wyciętych tarczycy, jak i po wycięciu jajników ad 8

SB 242784 jest inhibitorem o niskim nanomolach (IC50 = 26,3 nM) wrażliwej na bafilomycynę (wakuolarnej) Mg2 + -ATPazy w preparatach błonowych osteoklastów otrzymanych z kur niosek. Ponadto SB 242784 był bardzo silnym inhibitorem resorpcji kości (IC50 = 3,4 nM) w teście mierzącym fragmenty kolagenu uwalniane z kawałków kości po 48-godzinnej inkubacji z ludzkimi osteoklastami. Chociaż nie ma powodu, aby przypuszczać, że ekspresja dowolnej z podjednostek ATPazy została naruszona przez SB 242784, ta możliwość nie została wykluczona eksperymentalnie. W niniejszym artykule scharakteryzowaliśmy ten związek pod kątem jego selektywności względem ludzkiego enzymu osteoklastycznego w porównaniu z innymi V-H + -ATPazami w różnych tkankach ludzkich. Stosując test cytochemiczny in situ zdolny do pomiaru aktywności ATPazy w pojedynczych komórkach, można było wykazać, że SB 242784 ma ponad 1000-krotnie większą selektywność wobec V-H + -ATPazy osteoklastów w porównaniu z enzymem mierzonym w nerce, wątrobie, śledzionie, komórki żołądka, mózgu lub śródbłonka. Nie ma wpływu na inne komórkowe ATPazy. Mechanizm molekularny, dzięki któremu SB 242784 wywiera swoją selektywność, jest słabo poznany. Lipofilowy charakter tego związku może sugerować interakcję z jednym lub więcej składnikami integralnej domeny błony, na przykład podjednostką 116 kD, dla której zidentyfikowano różne izoformy u ludzi (29) i osteoklastów królika (37, 39) lub proteobifid 16-kD, którego sekwencja w ludzkim osteoklastach jest nadal nieznana i dla którego zidentyfikowano kilka genów w ludzkim genomie (40). W każdym przypadku wymagane są szczegółowe badania interakcji SB 242784 z podjednostkami enzymu, aby precyzyjnie zidentyfikować cel białkowy tej klasy inhibitorów. Obserwowana aktywność antyresorpcyjna in vitro SB 242784 jest mało prawdopodobna ze względu na jej działanie na różne enzymy, o których wiadomo, że uczestniczą w procesie resorpcji kości; jest to wspierane przez jego bardzo niską lub żadną aktywność hamującą wobec szeregu MMP lub katepsyn, które były hamowane przez SB 242784 tylko w stężeniach 5. M lub wyższych. Podczas badania na modelach zwierzęcych resorpcji kości in vivo, SB 242784 hamował resorpcję kości zarówno w modelach ostrych jak i przewlekłych u szczurów. Retinoid Ro 13-6298 wywoływał stymulację resorpcji kości, aw konsekwencji zwiększał poziomy wapnia w osoczu u szczurów TPTX (14). W tym ostrym modelu doustne podawanie SB 242784 przez 3 dni hamowało, w sposób zależny od dawki, hiperkalcemię wywołaną przez retinoid, z całkowitym zapobieganiem przy wyższej dawce 10 mg / kg. Utrata kości indukowana przez wycięcie jajników u szczurów i utrata kości po menopauzie mają podobne cechy, takie jak wzrost szybkości obrotu kostnego z resorpcją przekraczającą tworzenie, początkowa szybka faza utraty kości, a następnie wolniejsza faza, większa utrata gąbczasta niż kość korowa, zmniejszone napięcie jelitowe. wchłanianie wapnia i podobną odpowiedź kostną na leczenie estrogenem. Wszystkie te podobieństwa dostarczają mocnych dowodów na to, że model utraty szczurzej kości OVX jest odpowiedni do badania problemów, które są istotne dla utraty masy ciała po menopauzie (41). W tym modelu zwierzęcym leczenie przewlekłe przez okres 6 miesięcy przy użyciu doustnie SB 242784 w dawce 10 mg / kg / dobę w pełni zapobiegało spadkowi BMD indukowanemu przez wycięcie jajników w kości udowej i lędźwiowej w całym okresie leczenia. Zmniejszenie BMD w odcinku lędźwiowym kręgosłupa było istotnie zmniejszone również przy niższej dawce 5 mg / kg / d tego związku podawanej doustnie w 5 i 6 miesiącu. Kość stanowi główną grupę sieciujących PYD i DPD. Chociaż wykryto ilości DPD w tkankach miękkich, takich jak aorta i więzadła (42), to obrót kolagenu w tych tkankach jest bardzo niski, a zatem DPD w moczu można uznać za swoisty marker degradacji kolagenu w kościach (43). , 44). W dwóch badaniach wykazano ścisły związek między wydalaniem z sieci komórkowej moczu a szybkością resorpcji kości, co określono za pomocą pomiarów radioizotopowych i histomorfometrycznych. Ogólnie przyjmuje się, że te wiązania poprzeczne, mierzone w moczu, odzwierciedlają resorpcję kości (45). Stężenia DPD w moczu były znacząco zmniejszone w obu dawkach SB 242784 w 1. i 2. miesiącu, a przy wyższej dawce 10 mg / kg / dobę efekt ten był widoczny również w 3. miesiącu. W przeciwieństwie do estrogenu i grup modyfikację poziomów PYD obserwowano w grupach leczonych SB 242784. Te wskaźniki biochemiczne były zgodne z częściowym zahamowaniem wzrostu obrotu kostnego, który następuje po wycięciu jajników. Statyczna i dynamiczna histomorfometria proksymalnej kości piszczelowej potwierdziła, że SB 242784, przy wyższej dawce 10 mg / kg / dobę, zapobiegła indukowanej przez OVX utracie liczby i powierzchni belki.
[patrz też: supradyn opinie, orbitrek efekty po miesiącu, sanatorium krystyna busko ]
[przypisy: fenistil ulotka, supradyn opinie, szpital psychiatryczny toszek ]