Ocena stanu zapalnego i reakcji na leczenie w czasie rzeczywistym w mysim modelu alergicznego zapalenia dróg oddechowych czesc 4

Zgodnie z danymi z cytometrii przepływowej, stwierdziliśmy niewielkie różnice w aktywności katepsyny w płucach z umiarkowanym lub silnym alergicznym zapaleniem dróg oddechowych, jednak ta zróżnicowana aktywność nie była istotna i nie korelowała z naciekiem eozynofilowym w BAL. Tak więc aktywność katepsyny nie poinformowała o nasileniu alergicznej reakcji zapalnej. Aktywacja czujnika optycznego ukierunkowanego na MMP in vivo. Proteinazy wytwarzane przez eozynofile obejmują różne MMP, z których niektóre zaangażowane są w patologię astmy (36). Podejście na poziomie systemów integrujące kompendium ekspresji genów z mikromacierzy z wielu źródeł zidentyfikowało MMP-12 jako jedyną MMP, która była uporczywie zwiększona w płucach po indukcji alergicznego zapalenia dróg oddechowych z OVA (43). MMP-12 może być centralnym enzymem wytwarzanym przez granulocyty eozynochłonne, ponieważ ulega również ekspresji na wysokim poziomie u pacjentów z zapaleniem dróg oddechowych (33, 44, 45). Ponadto degraduje on składniki macierzy pozakomórkowej, promuje migrację i przebudowę komórek oraz organizuje produkcję IL-13 w mysich modelach zapalenia dróg oddechowych (24, 26, 31). Dlatego pomyśleliśmy, aby sprawdzić, czy czujnik MMP jest aktywowany u myszy z niedoborem MMP-12. Przygotowaliśmy zawiesiny pojedynczych komórek z tkanki płucnej zwierząt dzikiego typu i z niedoborem MMP-12p uprzednio uczulonych i prowokowanych OVA i stwierdziliśmy, że eozynofile gromadzą się skutecznie w płucach zwierząt w obu grupach (Figura 3A), ale wykazują upośledzoną aktywność MMP w tkance płucnej. w przeliczeniu na komórkę u myszy z niedoborem MMP-12 (Fig. 3B). Nieinwazyjna analiza FMT ujawniła także znaczną redukcję aktywności enzymatycznej w płucach myszy z niedoborem MMP-12 (Fig. 3, C i D), co zostało dodatkowo potwierdzone ex vivo przez FRI na wyciętej tkance płucnej (Suplemental Figura 5, A i B) . Wyniki te wskazują, że aktywacja docelowego czujnika in vivo wymaga MMP-12. Ponadto, nasze dane in vitro pokazały, że czujnik enzymu był aktywowany przez różne MMP, nie tylko przez MMP-12 (Suplementowa Figura 5C). Zatem nie można wykluczyć, że MMP inne niż MMP-12 również przyczyniają się do aktywacji czujnika pan-MMP u myszy typu dzikiego, chociaż brak aktywacji czujnika w płucach myszy z niedoborem MMP-12 (3 sugeruje dominację rola tej proteinazy podczas zapalenia dróg oddechowych z udziałem eozynofili. Figura 3D zwiększa aktywność MMP, w której pośredniczą eozynofile u myszy z niedoborem MMP-12. (A) Niedobór MMP-12 (3 (KO, zielony) i myszy typu dzikiego (czerwony) rekrutowały eozynofile do zapalonego płuca. Niekwestionowane myszy (niebieskie) służyły jako kontrole. (B) Myszy z niedoborem MMP-12c wykazywały zmniejszoną aktywność MMP w eozynofilach płucnych, co zidentyfikowano za pomocą cytometrii przepływowej. (C i D) Obrazowanie FMT ujawniło zmniejszoną aktywność MMP w stanach zapalnych płuc u myszy z niedoborem MMP-12 (3. Przeprowadzono co najmniej 2 niezależne eksperymenty, przy czym n = 3 na eksperyment i na grupę. Dane są średnie. SEM. * P <0,05 versus WT poddany prowokacji OVA. Badaliśmy także aktywność MMP w zapaleniu płuc wywołanym przez LPS i porównaliśmy je z opisanym powyżej modelem naszego zapalenia dróg oddechowych indukowanego OVA. W celu wytworzenia zapalenia płuc, w którym pośredniczy LPS, kohorty 6-8-tygodniowych samic myszy BALB / c otrzymały iniekcję około 15 .g LPS w soli fizjologicznej (46), podczas gdy myszy kontrolne otrzymywały PBS zamiast LPS. Wszystkie myszy analizowano za pomocą FMT 6, 18 lub 24 h po traktowaniu LPS i otrzymywano czujnik MMP 24 godziny przed obrazowaniem. Myszy uśmiercano natychmiast po obrazowaniu, a płyn BAL i tkankę płuc zbierano i przygotowywano do otrzymania zawiesin pojedynczych komórek. Barwienie H & E ujawniło silną infiltrację komórek immunologicznych w BAL myszy traktowanych LPS i OVA. Jednak komórki te były różnego rodzaju: leczenie LPS rekrutowało głównie neutrofile, podczas gdy leczenie OVA rekrutowało eozynofile, zgodnie z oczekiwaniami. W rzeczywistości obserwowaliśmy stosunek 24: neutrofili / eozynofili po leczeniu LPS i stosunek 1: 780 po leczeniu OVA (dodatkowa Figura 6, A i B). Analiza trawionych tkanek płuc wykazała podobne wyniki (podsumowanie Figura 6C). Co ważne, analiza FMT ujawniła znikomą aktywność MMP in vivo w płucach myszy traktowanych LPS w porównaniu z myszami leczonymi OVA (dodatkowa Figura 6D). Bliski brak aktywności MMP u myszy traktowanych LPS został dodatkowo potwierdzony ex vivo przez FRI na wyciętej tkance płucnej (dane nie pokazane) i przez cytometrię przepływową (dodatkowa Figura 6E). Zatem czujnik MMP jest selektywnie aktywowany u myszy z wywołanym OVA alergicznym zapaleniem dróg oddechowych (tj. Przez aktywowane eozynofile obecne w drogach oddechowych), ale nie po leczeniu LPS (tj. Bez aktywowanych eozynofili) [podobne: zapalenie trzustki u kota, szpital psychiatryczny toszek, protruzja krążka międzykręgowego ] [więcej w: supradyn opinie, szpital psychiatryczny toszek, komornik beata rusin ]