Ocena stanu zapalnego i reakcji na leczenie w czasie rzeczywistym w mysim modelu alergicznego zapalenia dróg oddechowych ad 7

Bronchoskopia światłowodowa jest obiecującym podejściem do tego celu. Rzeczywiście cewnik światłowodowy ma zastosowanie do ludzi, jest podręczny i nie wymaga dużego sprzętu do obrazowania. Jest zdolny do wizualizacji aktywności proteazowej głęboko w oskrzelach czwartego rzędu, a kliniczna wersja systemu obrazowania byłaby stosunkowo niedroga. Ponadto połączone zastosowanie czujnika MMP i cewnika światłowodowego nieinwazyjnie informuje o stopniu aktywności proteazy in vivo i koreluje z obszarem całkowitego stanu zapalnego płuc, co oceniono metodami ex vivo. Obecnie FMT jest bardziej odpowiedni do badań eksperymentalnych na stosunkowo małych modelach zwierzęcych. Jedną z możliwości translacji klinicznej byłaby jednak adaptacja technologii oksymetrii palca (59, 60) do tomograficznej oceny stanu zapalnego w próbkowanych rejonach dróg oddechowych. Wymagałoby to nagrania urządzenia interwostu do zlokalizowanych pomiarów. Przyszłe prace będą odpowiedzią, czy te lub inne optyczne lub nieoptymistyczne metody obrazowania mogą jeszcze bardziej poprawić naszą zdolność do diagnozowania choroby, oceny skuteczności leczenia i umożliwienia przeszczepienia klinicznego. Na przykład opracowanie czujników dla gatunków molekularnych, które są unikalne dla eozynofili i które umożliwiają obrazowanie molekularne, byłoby również przydatne do badania reakcji alergicznych. Postępy w obrazowaniu molekularnym umożliwiły badanie procesów biologicznych in vivo, nieinwazyjnie iw różnych skalach. Coraz więcej dowodów sugeruje, że podejścia oparte na kontekście są konieczne, ponieważ techniki ex vivo i in vitro nie rekapitulują złożonych bodźców środowiskowych, które kierują określoną reakcją (23, 40). Wiele z tych podejść można teraz przetłumaczyć, aby rozwiązać kluczowe problemy biologiczne w patofizjologii astmy. Jak miało to miejsce w innych chorobach, obrazowanie molekularne prawdopodobnie ułatwi szerokie, oparte na systemach zrozumienie zdarzeń komórkowych i molekularnych, które wyzwalają i rozprzestrzeniają chorobę. Metody Myszy. Myszy BALB / c i C57BL / 6 zakupiono od Taconic Farms Inc. Myszy z niedoborem MMP-12. na tle C57BL / 6 były prezentem od SD Shapiro (University of Pittsburgh, Pittsburgh, Pennsylvania, USA). Pięć dni przed obrazowaniem myszy umieszczono na wysoko oczyszczonej diecie zredukowanego manganu (Harlan) w celu zmniejszenia autofluorescencji powodowanej przez normalną dietę myszy karmiącej podczas obrazowania. Wszystkie eksperymenty na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Podkomisję ds. Badań nad zwierzętami w Massachusetts General Hospital. Indukcja alergicznego zapalenia dróg oddechowych. Grupy myszy w wieku 8. 10 tygodni uczulano raz (w dniu 0) lub dwa razy (w dniach 0 i 14) przez wstrzyknięcie ip 50. G OVA klasy VII (Sigma-Aldrich) zemulgowane w 2 mg ałunu (Sigma-Aldrich) w całkowitej objętości 500. l soli fizjologicznej. Myszy otrzymywały 4 w odpowiedzi na OVA (100 .g w 30 .l soli fizjologicznej) w dniach 8, 9, 10 i 11, jeśli uczulano raz i w dniach 18, 19, 20 i 21, jeśli uczulano dwukrotnie. Myszy poddano nieinwazyjnemu obrazowaniu (np. FMT, bronchoskopia NIRF i IVM) 24 godziny po ostatnim rzucie. Następnie BAL i płuca zebrano do dalszej analizy ex vivo. Myszy kontrolne uczulano OVA i ałunem, ale otrzymywały PBS podczas prowokacji. Indukowanie zapalenia płuc za pośrednictwem LPS. Grupy myszy BALB / c w wieku 8-10 tygodni otrzymywały po podaniu pojedynczej dawki około 15 .g LPS (Sigma-Aldrich) rozpuszczonego w 15 .l soli fizjologicznej. Myszy poddano nieinwazyjnemu obrazowaniu FMT 6, 18 i 24 godziny po podaniu LPS. Następnie BAL i płuca zebrano do dalszej analizy ex vivo. Myszy kontrolne otrzymały PBS zamiast LPS. Odzyskiwanie komórek. W celu odzyskania komórek ze światła dróg oddechowych tchawicę wyizolowano przez tępe cięcie, a rurki małego kalibru wstawiono i zabezpieczono w drogach oddechowych. Trzy objętości 500 .l PBS z 0,1% BSA wkroplono, delikatnie odessano i połączono. Komórki z BAL osadzano przez odwirowanie i zawieszano w PBS aż do użycia. Zróżnicowane zliczenia komórek przeprowadzono na komórkach BAL przez zliczenie co najmniej 500 komórek na preparatach z odwirowaniem cytogenicznym (Shandon EZ Single Cytofunnel, Thermo Scientific) barwionych H & E (Protokół HEMA 3, Fisher Scientific) zgodnie z protokołem producenta. Komórki różnicowano standardowymi procedurami hematologicznymi opartymi na morfologii komórek. Supernatanty BAL trzymano w temperaturze ~ 70 ° C do czasu użycia do oznaczenia poziomów cytokin IL-5. Aby odzyskać komórki z miąższu płuc, płuca perfundowano obficie PBS, natychmiast analizowano przez FRI, i pocięto na kawałki i inkubowano w 10 ml RPMI 1640 (Gibco; Invitrogen) zawierającym kolagenazę o stężeniu 0,2 mg / ml typu IV (Sigma-Aldrich). przez godzinę w 37 ° C
[patrz też: galareta wieprzowa kalorie, zapalenie trzustki u kota, komornik beata rusin ]
[przypisy: hydrokolonoterapia poznań, hydrokolonoterapia wrocław, raven market ]