Nowy model opryszczkowatego zapalenia skóry, który wykorzystuje transgeniczne myszy NOD HLA-DQ8 ad 9

Rekombinowana ludzka transglutamina naskórkowa została dostarczona przez nieżyjącego Petera Steinerta. Transglutaminaz ponownie zawieszono w PBS w stężeniu ug / ml i powleczono przez noc w temperaturze 4 ° C na płytkach Immulon 2 (Fisher Scientific International Inc.). Płytki blokowano roztworem soli buforowanym Tris (TBS) i 0,05% Tween-20 (Sigma-Aldrich) przez godzinę w temperaturze pokojowej. Surowice rozcieńczono 1: 100 i 1: 200 w TBS dla anty-TGe i 1: 200 i 1: 400 dla anty-tTG i inkubowano przez godzinę w temperaturze pokojowej. Wtórnym przeciwciałem była albo biotynylowana szczurzą anty-mysia IgA (1: 1000) z Accurate Chemical & Scientific Corp., albo biotynylowana anty-mysia IgG (1: 1,000) z Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc. Koniugatem enzymu była streptawidyna-HRP z Jackson ImmunoResearch. Laboratories Inc., a substratem była 3,3 (3,5, 5,5-tetrametylobenzydyna (TMB) firmy Sigma-Aldrich. Testy ELISA przeciw gliadynom i -glutenowi. Surową gliadynę lub gluten (Sigma-Aldrich) ponownie zawieszono w metanolu przy 10 mg / ml, a następnie rozcieńczono w absolutnym etanolu w stężeniu .g / ml. Sto mikrolitrów roztworu 1g / ml gliadyny / glutenu w etanolu umieszczono w każdej studzience płytki Immulon 2 (Fisher Scientific International Inc.), a następnie pozostawiono do wyschnięcia pod maską. Następnie płytkę blokowano 4% BSA / PBS przez 2 godziny w 37 ° C. Płytkę przemyto x PBS, 0,05% Tween-20. Próbki surowicy rozcieńczono do 0,1% BSA / PBS 1: 200, 1: 400 i 1: 800 i inkubowano przez godzinę w 37 ° C. Przeciwciała wykrywające były biotynylowanymi szczurzymi anty-mysimi IgA z Accurate Chemical & Scientific Corp. i biotynylowanymi anty-mysimi IgG z Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc. Koniugatem enzymu była streptawidyna-HRP, a substratem był TMB. Całkowite ELISA IgA i IgG. Próbki surowicy rozcieńczono do PBS 1: 200, 1: 400 i 1: 800 dla IgA i 1: 400, 1: 800 i 1: 1600 dla analizy IgG. Płytki powlekano przez noc w 4 ° C i blokowano 4% BSA / PBS przez godzinę w 37 ° C. Przeciwciała wykrywające były szczurzym przeciw mysiemu IgA (Accurate Chemical & Scientific Corp.) i anty-mysim IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.). Płytki inkubowano przez godzinę w 37 ° C. Koniugatem enzymu była streptawidyna-HRP, a substratem był TMB. Pomiar glukozy. Do testowania poziomu glukozy we krwi myszy stosowano glukometr DEX (Bayer Corp.). Pomiary glukozy wykonywano raz na 2 miesiące po pojawieniu się pęcherzyków, używając kropelek krwi, które zostały wyciągnięte przez obcinanie ogonów. Badania te zostały zatwierdzone przez Fundację Mayo Institutional Animal Care and Use Committee. PodziękowaniaTo dzieło zostało wsparte dotacjami z Fundacji Oberkotter, NIH przyznaje AI14764 i DK57892 oraz Fundację Mayo. Chcielibyśmy również podziękować za pomoc Soo Youl Kim i nieżyjącego Petera Steinerta w dostarczaniu odczynników TGe. Przypisy Niestandardowe skróty: Abo, bez endogennego mysiego MHC II; ACD, alergiczne kontaktowe zapalenie skóry; cpdm, przewlekłe proliferacyjne zapalenie skóry; DH, opryszczkowe zapalenie skóry; fsn, łuszcząca się skóra; Idd, cukrzyca insulinozależna; TGe, transglutaminazy naskórkowej; tTG, transglutaminazy tkankowe. Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów.
[podobne: protruzja krążka międzykręgowego, klinika bocian białystok, orbitrek efekty po miesiącu ]
[podobne: beata rusin komornik, komornik sądowy beata rusin, duszacy kaszel ]