Nowy model opryszczkowatego zapalenia skóry, który wykorzystuje transgeniczne myszy NOD HLA-DQ8 ad 8

Chow oznaczony jako bezglutenowy był oczyszczonym składnikiem mysiej karmy uzyskanej z Research Diets Inc. (dieta gryzoni AIN-76A). Zawiera kazeinę, metioninę, cystynę, skrobię kukurydzianą, sacharozę, maltodekstrynę, celulozę, olej kukurydziany, olej sojowy, minerały i witaminy. Chow oznaczony jako normalna lub zwykła karma dla myszy (LabDiet; PMI Nutrition International) zawiera pszenicę mieloną, mączkę sojową, mączkę z kiełków pszenicy, mączkę rybną, tłuszcz zwierzęcy konserwowany hydroksyanizolem butylowym (BHA), suszoną serwatkę, kazeinę, olej sojowy, węglan wapnia gluten kukurydziany, sól, minerały i witaminy. Leczenie dapsonem. Czterdzieści mikrogramów sulfonu 4-aminofenylu (dapson, Sigma-Aldrich) podawano codziennie przez zgłębnik przez 4-6 tygodni. Dawka wynosi około mg / kg na dobę przy średniej masie myszy 30 g, co jest podobne do dawkowania u ludzi w oparciu o dawkę dobową mg / kg (26). Biopsja ucha. Biopsje ucha wykonano przed śmiercią i po śmierci. Biopsja przed zarażeniem polegała na znieczuleniu zwierzęcia za pomocą inhalacji izofluranem (Abbott Laboratories), a następnie za pomocą stempla skóry (Acuderm Inc.) w celu usunięcia niewielkiej części ucha. Sekcje biopsji pośmiertnej pobierano z całego ucha. Próbki ze skóry bliznowatej, skóry niestrawnej lub skóry innej niż niezwiązane nigdy nie były zamrożone w ciekłym azocie w celu bezpośredniej lub pośredniej analizy immunofluorescencyjnej lub utrwalone w formalinie osadzonej w parafinie i poddane obróbce w celu barwienia H & E. Analiza jelita cienkiego. Po uśmierceniu jelita usunięto, a odcinki jelita krętego, jelita czczego i dwunastnicy długości cm usunięto i przepłukano wolnym od wapnia i magnezu (CMF, 2% FBS, x HEPES, x HBSS). Skrawki o długości cm następnie rozcięto, tak, że 2 pionowe sekcje o głębokości 2 mm i przekrój podłużny o długości 4 mm pokrojonej wzdłużnie umieszczono w formalinie. Barwienie H & E. Próbki skóry i jelit utrwalone w formalinie zostały zatopione w parafinie, podzielone na części, przetworzone i wybarwione H & E. Bezpośrednie badanie immunofluorescencyjne. Krążki o grubości 5 mikronów (Leica CM3050, Leica Microsystems Inc.) z każdej próbki umieszczono na szkiełkach z matowego szkła (Ultra Frost Rite-on, BD). Sprzężone z FITC anty-mysie IgA (rozcieńczenie 1: 4, 1,1 mg / ml, Sigma-Aldrich) lub skoniugowane z FITC przeciwciało przeciwko mysiej IgG (rozcieńczenie 1: 300; 16 ug / ml) zastosowano do wykrywania mysich osadów IgA lub IgG w sekcjach. Oczyszczony anty-mysi kolagen IV zakupiono od firmy USBiological Inc. i wykryto stosując skoniugowaną z Rhodamine Red-X anty-króliczą IgG z Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc. Oczyszczone anty-rekombinowane ludzkie przeciwciało TGe zostało dostarczone przez Soo Youl Kim i wykryte przy użyciu Rhodamine Red. -XP skoniugowane anty-królicze IgG. Sprzężone z FITC przeciwciało anty-neutrofilowe 7/4 zakupiono od Caltag Laboratories Inc. Szczurzą IgG skoniugowaną z FITC sprzężoną z anty-keyhole limpet hemocyanin (anty-KLH) zastosowano jako kontrolę izotypową dla przeciwciała 7/4 (BD Biosciences. Pharmingen). Oczyszczoną anty-neutrofilową elastazę zakupiono z Santa Cruz Biotechnology Inc. Całe kozie IgG zastosowano jako kontrolę izotypową dla elastazy anty-neutrofilowej (Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.). Oczyszczone przeciwciało anty-mysie MBP (14.7.4) zostało dostarczone przez Jamesa Lee (Mayo Clinic, Scottsdale, Arizona, USA). Sprzężone z FITC anty-CD4 i anty-CD8, jak również oczyszczony zestaw anty-c-kit otrzymano z BD Biosciences. Pharmingen. Wtórne przeciwciała otrzymano z Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc. i składały się ze sprzężonego z FITC anty-koziej IgG dla anty-neutrofilowej elastazy i skoniugowanego z FITC anty-szczurzego IgG dla 14.7.4 i anty-c-kit. Preparaty były oglądane przy użyciu 3 różnych mikroskopów, mikroskopu Zeiss Axioplan (Carl Zeiss International), mikroskopu badawczego Olympus AX70 (Olympus Corp.) i mikroskopu konfokalnego ze skanera laserowego Zeiss Axiovert 100M (Carl Zeiss International). Pośrednie barwienie przy użyciu myszy i skóry ludzkiej. Biopsje uszne od naiwnych myszy NOD Abo DQ8 + i kontrolne biopsje ludzkiej skóry umieszczono w 1,0 M NaCl i inkubowano w temperaturze 4 ° C przez 2. 3 dni. Po pojawieniu się pęcherzy na skórze próbki zostały szybko zamrożone w ciekłym azocie i przetworzone w sposób opisany w poprzednim rozdziale. Surowice rozcieńczono w stosunku 1:20 do barwienia, a do wykrycia surowic związanych z skórą zastosowano skoniugowane z FITC przeciwciało anty-IgA i skoniugowane z FITC przeciwciało anty-IgG. Wykrywanie przeciwciał endomysowych. Surowice z myszy z pęcherzami dodano w rozcieńczeniu 1:20 do przełyku małpiego (Oregon National Primate Research Center), a drugorzędowymi przeciwciałami były anty-mysie IgA (1: 4) lub anty-mysie IgG (1: 300). Test ELISA anty-tTg i -TGe. Transglutaminaza tkankowa pochodzi od świnek morskich (Sigma-Aldrich)
[więcej w: toksyczni rodzice chomikuj, klinika bocian białystok, bromatologia i chemia toksykologiczna ]
[więcej w: supradyn opinie, szpital psychiatryczny toszek, komornik beata rusin ]