Inhibitory izomeraz białkowych disiarczkowych stanowią nową klasę środków przeciwzakrzepowych

Zakrzepica lub tworzenie zakrzepów krwi i jej następstwa pozostają główną przyczyną zachorowalności i umieralności, a nawracająca zakrzepica jest powszechna pomimo obecnej optymalnej terapii. Izomeraza dwusiarczku białka (PDI) jest oksydoreduktazą, która ostatnio wykazała udział w powstawaniu zakrzepu. Podczas gdy obecnie dostępne środki przeciwzakrzepowe hamują zarówno agregację płytek, jak i wytwarzanie fibryny, hamowanie wydzielanego PDI blokuje najwcześniejsze etapy tworzenia skrzepliny, hamując obie ścieżki. Tutaj badaliśmy zewnątrzkomórkowe PDI jako alternatywny cel terapii przeciwzakrzepowej. Wysoce przepustowy test zidentyfikował 3-rutynozynę kwercetyny jako inhibitor aktywności reduktazy PDI in vitro. Hamowanie PDI było selektywne, ponieważ 3-rutozyd kwercetyny nie hamował aktywności reduktazy kilku innych izomerów tiolowych znajdujących się w układzie naczyniowym. Testy komórkowe wykazały, że 3-rutynozyd kwercetyny hamował agregację płytek ludzkich i mysich oraz wytwarzanie fibryny za pośrednictwem komórek śródbłonka w ludzkich komórkach śródbłonka. Korzystając z mikroskopii wewnątrzgałkowej u myszy, wykazaliśmy, że 3-rutozyd kwercetyny blokuje powstawanie zakrzepów in vivo poprzez hamowanie PDI. Infuzja rekombinowanego PDI odwracała efekt przeciwzakrzepowy 3-rutynozydu kwercetyny. Zatem PDI jest żywym celem dla drobnocząsteczkowej inhibicji tworzenia skrzepliny, a jego hamowanie może okazać się użytecznym dodatkiem w opornych chorobach zakrzepowych, które nie są kontrolowane za pomocą konwencjonalnych środków przeciwzakrzepowych. Wprowadzenie Izomeraza dwusiarczku białka (PDI) jest prototypowym członkiem rodziny rozszerzonych oksydoreduktaz, najlepiej znanych jako endoplazmatyczne enzymy rezydujące w retikulum. Enzymy te katalizują potranslacyjne tworzenie i wymianę wiązań dwusiarczkowych i służą jako białka opiekuńcze podczas zwijania białka (1). Pomimo posiadania sekwencji retikulum retikulum C-terminalnej retikulum, PDI zidentyfikowano w wielu różnych lokalizacjach subkomórkowych poza retikulum endoplazmatycznym. Ma funkcje biologiczne na powierzchni komórek limfocytów, hepatocytów, płytek krwi i komórek śródbłonka (2. 6). Płytki krwi są bogatym źródłem pozakomórkowego PDI, eksprymującego to białko na swojej powierzchni, a także wydzielającego PDI w odpowiedzi na stymulację trombiną (5, 7). Komórki śródbłonka również wykazują ekspresję PDI po stymulacji agonistycznej lub po prowokacji przez uszkodzenie naczyniowe (3, 8). Wcześniej wykazaliśmy, że PDI jest szybko wydzielany z obu komórek śródbłonka i płytek krwi podczas tworzenia skrzepliny in vivo (7, 8). Hamowanie PDI przy użyciu przeciwciał neutralizujących blokuje tworzenie skrzeplin w kilku modelach zakrzepicy (pozycje 6. 9 i L. Bellido-Martin, B. Furie, BC Furie, niepublikowane obserwacje). Hamowanie PDI w tych modelach znosi nie tylko gromadzenie się płytek w miejscu urazu, ale także wytwarzanie fibryny (7, 8). Obserwacje te wskazują na krytyczną rolę zewnątrzkomórkowego PDI w inicjacji tworzenia skrzepliny. Silna aktywność przeciwzakrzepowa neutralizujących przeciwciał skierowanych przeciwko PDI wskazuje, że PDI może być użytecznym celem w farmakologicznej kontroli tworzenia skrzepliny. Jednak potencjalnymi powikłaniami hamowania PDI są wszechobecna dystrybucja i krytyczna funkcja wewnątrzkomórkowego PDI. Przewlekłe wyciszanie PDI jest toksyczne w hodowanych komórkach (10), a zwierzęta z niedoborem PDI nie zostały opracowane. Ponadto obecnie dostępne inhibitory PDI są związkami reaktywnymi w sulfhydrylach, które wiążą się kowalencyjnie w miejscu katalitycznym CXXC (11); są nieselektywne, działając szeroko na izomery tiolowe (12); lub są cytotoksyczne (13, 14). Identyfikacja nowych małych cząsteczek, które zakłócają aktywność PDI, ale są poza tym nietoksyczne, jest wymagana do przetestowania możliwości celowania w PDI w celu zahamowania powstawania zakrzepu. Aby zidentyfikować inhibitory przeciwzakrzepowe PDI, przeszukaliśmy bibliotekę małocząsteczkową wzbogaconą o związki bioaktywne. Ten ekran zidentyfikował 3-rutozyd kwercetyny jako selektywny inhibitor aktywności PDI. Kwercetyno-3-rutozyd jest obficie występującym flawonolem w wielu powszechnie spożywanych pokarmach. Stwierdziliśmy, że 3-rutozyd kwercetyny hamował powstawanie skrzepliny w stężeniach, które są dobrze tolerowane u myszy i ludzi. Hamowanie tworzenia skrzeplin przez 3-rutynozynę kwercetyny u myszy zostało całkowicie odwrócone przez wlew rekombinowanego PDI. Odkrycia te wskazują na możliwość celowania w PDI w celu zahamowania tworzenia skrzepliny. Wyniki Identyfikacja 3-rutozydu kwercetyny jako silnego inhibitora PDI. Zastosowaliśmy test turbidymetryczny na bazie insuliny zmodyfikowany do wysokowydajnych badań przesiewowych w celu identyfikacji silnych i selektywnych drobnocząsteczkowych inhibitorów PDI (15)
[więcej w: komornik sądowy beata rusin, ubezpieczenie nfz za granicą, zaburzenia afektywne dwubiegunowe ]
[podobne: hydrokolonoterapia wrocław, raven market, engerix b cena ]