Inhibitory izomeraz białkowych disiarczkowych stanowią nową klasę środków przeciwzakrzepowych ad 6

Hamowanie PDI przy użyciu przeciwciał neutralizujących blokuje tworzenie zakrzepów in vivo po podwiązaniu tętnicy szyjnej (9), ekspozycji na chlorek żelazowy (niepublikowane obserwacje, L. Bellido-Martin, B. Furie i BC Furie) lub uszkodzenie laserem (7, 8), wykazanie istotnej roli PDI w tworzeniu się skrzepu w wielu modelach. Obserwacja ta rodzi pytanie, czy można zastosować małocząsteczkowe hamowanie PDI do kontrolowania tworzenia się skrzeplin in vivo, w szczególności z tą korzyścią, że zarówno gromadzenie się płytek krwi, jak i wytwarzanie fibryny są blokowane po zahamowaniu PDI. Kilka obserwacji wskazało, że PDI jest istotnym celem molekularnym 3-rutynozyny kwercetyny w naszych badaniach nad tworzeniem skrzepliny. Kwercetyno-3-rutozyd selektywnie hamował PDI, bez znaczącego hamowania innych izomerów tiolowych, które mogły być obecne w układzie naczyniowym podczas tworzenia skrzepliny. Strukturalnie pokrewny analog 3-rutozydu kwercetyny, diosmetyny, który nie hamuje PDI, nie hamuje tworzenia skrzepliny. Ponadto aktywność przeciwzakrzepową 3-rutozydu kwercetyny całkowicie odwrócono po infuzji rekombinowanego PDI. Tak więc, chociaż 3-rutozyd kwercetyny może mieć inne właściwości fizjologiczne, dominującym efektem 3-rutozydu kwercetyny w powstawaniu skrzepliny jest hamowanie zewnątrzkomórkowej funkcji PDI, zapobiegając w ten sposób powstawaniu skrzepów po uszkodzeniu naczyń. Inhibicja PDI zapobiega zarówno gromadzeniu się płytek krwi, jak i wytwarzaniu fibryny podczas tworzenia skrzepliny. Chociaż substraty aktywowane przez PDI podczas tworzenia skrzepliny pozostają nieznane, zaproponowano kandydatów. PDI jest zaangażowany w agregację płytek z udziałem IIbp3 (2, 24). Przeciwciała skierowane przeciwko PDI hamują agregację płytek in vitro (4), a ten efekt został częściowo przypisany wpływowi PDI na konformację | llb | 3 (4, 25). Glikoproteina 1b. zawiera wolne tiole i jest modyfikowany przez PDI (5). Katalizowana przez PDI dwusiarczkowa wymiana wpływa również na adhezję kolagenu do <2. (26). Kwercetyno-3-rutozyd hamował agregację płytek krwi in vitro. Ponadto, osocze bogate w płytki myszy, którym podawano infuzję 3-rutozydu kwercetyny, wykazywało osłabioną agregację w porównaniu z osoczem bogatym w płytki od myszy kontrolnych, gdy testowano je ex vivo (Figura 4C), co wskazuje, że związek bezpośrednio uszkadza agregację płytek. Jednak bezpośredni wpływ 3-rutozydu na kwarktynę na receptory płytek in vivo pozostaje do ustalenia. Tworzenie fibryny po wywołanym laserem uszkodzeniu tętniczek występuje w sposób niezależny od płytek krwi, a śródbłonek jest ważnym źródłem PDI podczas tworzenia skrzepliny (8,27). Wcześniejsze badania z użyciem hodowanych komórek śródbłonka wykazały, że tworzenie fibryny zależy od PDI pochodzącego z komórki śródbłonka (8). Stwierdziliśmy, że 3-rutozyd kwercetyny hamował tworzenie fibryny na hodowanych komórkach śródbłonka o w przybliżeniu takiej samej sile, jak hamuje oczyszczony PDI w teście z oznaczeniem reduktazy insuliny. 3-rutynozynian kwercetyny nie hamował aktywacji komórek śródbłonka (dodatkowa Figura 2, Ap) i nie hamował tworzenia fibryny indukowanej przez trombinę (Supplemental Figure 2D). Obserwacje te są zgodne z efektem 3-rutynozyny kwercetyny na PDI. Odpowiednie substraty PDI na śródbłonku nie są znane. Katalizowane przez izomerazy tiolowe utlenianie allosterycznego wiązania dwusiarczkowego w czynniku tkankowym może przekształcić go z niekoagulującego stanu kryptycznego w stan odszyfrowany prokoagulacyjnie przez utlenianie za pośrednictwem PDI (28. 30). Jednak rola PDI w deencryption czynników tkankowych jest kontrowersyjna i zaproponowano pośrednie ścieżki (31). avp3 jest także domniemanym substratem PDI na komórkach śródbłonka (32), chociaż jego rola w tworzeniu skrzepów nie jest znana. Alternatywnie, pozakomórkowy PDI został wywołany w reakcji transnitrosowania, umożliwiając dostarczanie tlenku azotu ze środowisk zewnątrzkomórkowych do wewnątrzkomórkowych (33). Obserwacja, że powszechnie przyjmowany flawonol i jego metabolity są silnymi inhibitorami PDI, wskazuje na możliwość celowania w PDI bez znaczącej toksyczności. Genetyczna delecja PDI jest toksyczna dla komórek (10, 34). Podstawowa rola PDI w tworzeniu wiązań dwusiarczkowych i zwijaniu białek rodzi pytanie, czy hamowanie PDI może być dobrze tolerowane. Stwierdziliśmy, że 3-rutozyd kwercetyny nie wykazuje toksyczności w hodowanych komórkach śródbłonka przez co najmniej 72 godziny przy stężeniach tak wysokich, jak 100 (xM-3-rutozydu na kwercetynę (dane nie przedstawione). 3-rutozyd kwercetyny może nie być toksyczny, ponieważ takie samo wiązanie glikozydowe, które jest wymagane do hamowania aktywności PDI, zmniejsza przepuszczalność komórek [hasła pokrewne: sanatorium krystyna busko, klinika bocian białystok, galareta wieprzowa kalorie ] [więcej w: beata rusin komornik, komornik sądowy beata rusin, duszacy kaszel ]