Inhibitory izomeraz białkowych disiarczkowych stanowią nową klasę środków przeciwzakrzepowych ad 5

Dane pochodzą od 30 zakrzepów u 3 myszy dla każdego stanu. PDI jest celem hamowania tworzenia się skrzeplin kwercetyna-3-rutozyd in vivo. Aby ocenić selektywność hamowania PDI przez 3-rutynozynę kwercetyny podczas tworzenia skrzepu, aktywność przeciwzakrzepową diosmetyny oceniano w modelu zakrzepicy. Diosmetyna nie ma grupy hydroksylowej w pozycji 3 pierścienia C i nie może ulegać glikozylacji w tej pozycji (Figura 2). Zgodnie z jego niezdolnością do blokowania aktywności PDI in vitro, diosmetyna nie miała znaczącego wpływu na akumulację płytek ani na tworzenie fibryny po wywołanym laserem uszkodzeniu naczyń (Figura 8). Badania farmakokinetyczne wykazują, że diosmetyna jest usuwana wolniej niż 3-rutynozyd kwercetyny (23). Zatem brak działania diosmetyny na tworzenie się skrzeplin w porównaniu z powstawaniem 3-rutynozydu kwercetyny nie jest drugorzędny w stosunku do szybkiej eliminacji lub metabolizmu. Wynik ten pokazuje, że strukturalnie spokrewniony flawonol, który nie ma aktywności hamującej PDI, nie blokuje tworzenia skrzepów in vivo. Rycina 8 Analogowa diosmetyna kwercetyny nie wpływa na powstawanie skrzeplin i wytwarzanie fibryny in vivo. Specyficzne dla płytek krwi przeciwciało anty-CD42b skoniugowane z Dylight 649 (0,1 ug / g masy ciała) i specyficznym dla fibryny mysim przeciwludzkim monoklonalnym przeciwciałem monoklonalnym fibryny II sprzężonym z Alexa Fluor 488 (0,5 ug / g masy ciała) były podawany do myszy. Diosmetynę w dawce 10 mg / kg masy ciała lub kontrolę nośnika podawano następnie dożylnie bezpośrednio przed początkowym uszkodzeniem laserem. Reprezentatywne binaryzowane obrazy pojawiania się sygnałów fluorescencji związanych z fibryną (zielony) i płytkami krwi (czerwony) w ciągu 180 sekund po wywołanym laserem uszkodzeniu ściany naczynia u myszy typu dzikiego przedstawiono w A i B, u myszy z infuzją (A) tylko pojazd lub (B) diosmetyna w ilości 10 mg / kg masy ciała. (C) Mediana zintegrowanej intensywności fluorescencji płytek i (D) mediany zintegrowanej intensywności fluorescencji fibryny w miejscu urazu wykreślono w funkcji czasu, z myszami, którym podawano infuzję tylko nośnikiem (czarny) lub 10 mg / kg diosmetyny (niebieski). Dane pochodzą od 30 zakrzepów u 3 myszy dla każdego stanu. Oryginalne powiększenie, × 60. Paski skali: 10 .m. Następnie zbadaliśmy zdolność wszczepionego egzogennego rekombinowanego PDI w celu przezwyciężenia hamującego działania 3-rutozydu na kwarcetynę na tworzenie się skrzepu. Myszom podawano wlewek z 3-rutynozyną lub nośnikiem kwercetyny, a następnie połowę myszy w każdej grupie infuzowano bolusem rekombinowanego PDI przed uszkodzeniem laserem (Figura 9). Podobnie jak poprzednio infuzja kwercetyny-3-rutozydu powodowała zmniejszenie gromadzenia się płytek krwi (Figura 9, B i E) i odkładanie fibryny (Figura 9, B i F). Efekt ten był całkowicie odwrócony u myszy, które otrzymały infuzję egzogennego rekombinowanego PDI (Fig. 9, C, E i F). Wlew egzogennego PDI przy braku wcześniejszej infuzji 3-rutynozydu kwercetyny nie wpływał istotnie na wielkość skrzepliny lub wytwarzanie fibryny w porównaniu z tymi u nieleczonych myszy (Figura 9, Dł F). Wyniki te pokazują, że ilość PDI uwalnianego przez komórki śródbłonka i płytki krwi po aktywacji komórek w miejscu uszkodzenia jest wystarczająca do wygenerowania maksymalnej odpowiedzi zakrzepowej na bodziec. Ponadto potwierdzają interpretację, że osłabienie powstawania skrzepów in vivo przez 3-rutynozynę kwercetyny odbywa się poprzez hamowanie PDI. Rycina 9 Ekogenny PDI odwraca hamowanie przez kwercetyno-3-rytynozynę tworzenia skrzepu i wytwarzania fibryny in vivo. Przeciwciało skoniugowane z Dylight 649 (3 anty-CD42b i skoniugowane z fibryną specyficzne przeciwciało specyficzne dla fibryny Alexa Fluor 488. Myszy następnie podawano w infuzji samym nośnikiem (A i D) lub (B i C) 0,25 mg / kg 3-rutozydu na kercytynę. Po 6 do 12 początkowych skrzeplinach, myszom podano dożylnie nośnik (A i B) lub (C i D) PDI przy 200 ug na mysz, aby zarejestrować dodatkowe skrzepliny. Reprezentatywne binaryzowane obrazy pojawiania się sygnałów fluorescencyjnych związanych z fibryną (zielony) i płytkami krwi (czerwony) w ciągu 180 sekund po wywołanym laserem uszkodzeniu ściany naczynia. (E) Mediana zintegrowanej fluorescencji płytek i (F) mediana zintegrowanej fluorescencji fibryny w miejscu urazu myszy, którym podawano tylko infekcję nośnikiem (czarny), 0,25 mg / kg 3-rutozydu na kwercetynę, a następnie nośnik (zielony), nośnik, a następnie 200 .l. g rekombinowany PDI (czerwony) lub 0,25 mg / kg kwercetyno-3-rutinozyd, a następnie 200 .g rekombinowanego PDI (niebieski). Dane pochodzą od 30 zakrzepów u 3 myszy dla każdego stanu. Oryginalne powiększenie, × 60. Paski skali: 10 .m. Dyskusja Identyfikacja 3-rutynozydu kwercetyny jako antagonisty PDI i inhibitora tworzenia skrzeplin potwierdza PDI jako cel leku w terapii przeciwzakrzepowej
[podobne: mazak gostyń, staw ramienno promieniowy, toksyczni rodzice chomikuj ]
[podobne: supradyn opinie, szpital psychiatryczny toszek, komornik beata rusin ]