Docelowa szczepionka DNA kodująca ligand Fas określa podwójną rolę w regulacji eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia

W tym badaniu zastosowano nagie szczepienie DNA w celu wywołania rozpadu tolerancji na siebie, a tym samym wywołania pamięci immunologicznej na natywny, związany z błoną ligand Fas (FasL). Po indukcji eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia (EAE) pamięć ta została włączona, aby zapewnić odporność ochronną. Przeciwciała swoiste dla FasL wyizolowane od zwierząt chronionych różnicowały w dół wytwarzanie in vitro TNF-a, ale nie IFN-y, przez hodowane komórki T. Te autoprzeciwciała były wysoce ochronne, gdy podawano je szczurom na początku EAE. Przeciwnie, podawanie tych swoistych dla FasL przeciwciał u szczurów EAE po szczycie ostrej fazy choroby zapobiegało spontanicznemu wyleczeniu z choroby. Ta przedłużona choroba jest częściowo wyjaśniona przez hamowanie apoptozy komórek jednojądrzastych na docelowym narządzie, co skutkuje zwiększoną akumulacją komórek T i makrofagów w miejscu zapalenia. Stąd FasL wywiera dwie odrębne, swoiste dla etapu funkcje regulacyjne w kontrolowaniu tej autoimmunologicznej choroby centralnego układu nerwowego, w której pośredniczy komórka T. Wstęp Fasand ligandu (CD95L; FasL), białko transbłonowe typu II należące do rodziny TNF, odgrywa istotną rolę zarówno w cytotoksyczności, w której pośredniczą cytotoksyczne limfocyty T (CTL), jak i homeostazie układu odpornościowego (1, 2). W obydwu przypadkach funkcje FasL wiążą Fas (CD95), członka rodziny receptorów TNF i powodują apoptozę w komórce docelowej (3). Fas ulega konstytucyjnej ekspresji w wielu różnych tkankach (4), podczas gdy FasL ulega ekspresji przede wszystkim przez aktywowane komórki T i komórki NK (3, 5). Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia (EAE) jest autoimmunologiczną chorobą ośrodkowego układu nerwowego (CNS), w której pośredniczy komórka T, która służy jako model dla ludzkiego stwardnienia rozsianego (MS). W obu chorobach krążące leukocyty przenikają przez barierę krew-mózg i uszkadzają mielinę, powodując upośledzenie przewodnictwa nerwowego i paraliż (6. 9). Rola różnych prozapalnych i regulatorowych cytokin w przejawianiu i regulacji choroby została szeroko zbadana. Prozapalne cytokiny, takie jak TNF-a, odgrywają kluczową rolę w inicjacji i progresji autoimmunologicznego procesu zapalnego, podczas gdy IL-4, IL-10 i TGF-a. są zaangażowani w regulację choroby. Tak więc, zniesienie TNF-a czynności prozapalne przez neutralizujące Ab (10), rozpuszczalną terapię receptorową (11) lub zmianę równowagi Th1 / Th2 w kierunku komórek IL-4a o niskim poziomie TNF – a, mogą zapobiegać, a nawet odwracać trwająca choroba (12, 13). Ostatnie badania wykazały, że oddziaływanie FasL z jego przeciwreceptorem odgrywa ważną rolę w rozwoju i regulacji autoimmunizacji (14. 22). Z jednej strony okazało się, że interakcja Fas-FasL jest niezbędna do utrzymania homeostazy komórkowej w układzie odpornościowym (2, 23, 24). Tak więc, myszy z mutacją w genie Fas (lpr) cierpią na układową chorobę toczniową podobną do tocznia rumieniowatego (podobną do SLE), co prawdopodobnie wynika z niepowodzenia w negatywnej selekcji samoreaktywnych komórek T (22). Z drugiej strony, u myszy z niedoborem Fas lub FasL (myszy lpr lub gld) stwierdzono wysoką oporność lub pojawienie się złagodzonej postaci EAE (20, 21). Ponadto, transgeniczne myszy NOD FasL wykazywały zwiększoną wrażliwość na cukrzycowe komórki T, z powodu samozniszczenia komórek beta po indukowanej przez T-komórkach Fc Fas, podczas gdy zwierzęta Fas-ujemne NOD (lpr / lpr) były oporne na diabetogenne komórki T i do spontanicznej cukrzycy (16, 17). Zatem gromadzenie danych uzyskanych u myszy transgenicznych i z niedoborem genetycznym sugeruje, że interakcja Fas-FasL może wykazywać więcej niż jedną rolę w regulacji odporności swoistej dla samego siebie, a w szczególności za pośrednictwem autoimmunizacji za pośrednictwem limfocytów T (14, 15). Niedawno wykorzystaliśmy nowatorską technologię szczepień nagiego DNA, aby stworzyć własną odporność na różne chemokiny CC, będące przedmiotem zainteresowania, a tym samym zapobiec rozwojowi EAE (25). Późniejsza administracja MIP-1. lub DNA wytworzone przez MCP-1 wytworzyło swoistą odporność swoistą wobec produktu każdego konstruktu. Każde samoistne miano Ab przyspieszyło zgodnie z postępem choroby u kontrolnych szczurów EAE i uległo regresji po wyleczeniu. Te przeciwciała Ab były neutralizujące in vitro i zdolne do przenoszenia wysokiego stanu odporności na EAE. Obecne badanie wykorzystuje podobną strategię do generowania odporności specyficznej dla FasL i oceny roli FasL w regulacji EAE. Metody Szczury. Samice szczurów Lewisa w wieku około 6 tygodni zakupiono od Harlan Laboratories Ltd. Israel (Jerozolima, Izrael) i utrzymywano w warunkach wolnych od patogenów w naszym zakładzie dla zwierząt. Antygeny peptydowe
[patrz też: beata rusin komornik, multimed zamość, bromatologia i chemia toksykologiczna ]
[więcej w: multimed zamość, ziaja dermatologiczna baza z tlenkiem cynku, test obciążenia glukozą 75g normy ]