Docelowa szczepionka DNA kodująca ligand Fas określa podwójną rolę w regulacji eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia ad 6

Dwadzieścia cztery godziny później zebrane supernatanty i poziomy TNF-a zostały określone. Wyniki trzech powtórzeń przedstawiono jako średnie. Morze). Dodatkowo, w tym czasie mRNA ekstrahowano i poddano analizie TNF-a RT-PCR. i transkrypcja mRNA IL-18 (b), jak opisano w innym miejscu (13, 29). Podawanie przeciwciał specyficznych wobec FasL we wczesnym stadium choroby daje odporność na EAE. Oczyszczone przeciwciała specyficzne dla FasL oceniano następnie pod względem ich kompetencji do przenoszenia ochrony przed aktywną (Figura 5a) i przenoszono (Figura 5b) EAE. Kolejne podanie tych Ab rozpoczynających się na 1. 3 dni przed wystąpieniem choroby prowadziło do znacznego zmniejszenia wyniku klinicznego choroby (Figura 5, a i b) i histologicznego (Figura 6). Oznacza to, że wszystkie szczury kontrolne EAE immunizowane p68-86 / CFA, a następnie traktowane PBS lub IgG (oczyszczone białko G) od albo naiwnych lub leczonych pcDN3 szczurów EAE rozwinęły ciężki EAE (Figura 5a, średnia maksymalna ocena 2,5. Odpowiednio 0,24, 2,33. 0,23 i 2,33. 0,23). Przeciwnie, osoby traktowane oczyszczonymi AbL specyficznymi dla FasL wykazywały łagodną postać choroby (średnia maksymalna wartość 0,833. 0,3, P <0,001, w porównaniu z każdą grupą kontrolną). Hamowaniu choroby towarzyszyło znaczące, ale nie całkowite zmniejszenie nacieku komórek jednojądrzastych komórek (Figura 6d w porównaniu z Figurą 6, b i c, średnie wyniki histologiczne 0 0 w porównaniu z 2,3 . 0,2 w każdej grupie kontrolnej). Aby ocenić możliwość, że podawanie AbL specyficznego dla FasL wpłynęło na apoptozę w OUN, przeanalizowaliśmy zmiany EAE pod kątem fragmentacji DNA w umierających komórkach przy użyciu testu TUNEL. Wycinki OUN z naiwnego mózgu bez nacieku jednojądrzastego (Figura 6a) nie wykazały żadnych komórek TUNEL-dodatnich. Przeciwnie, skrawki z mózgów EAE szczurów, które traktowano PBS lub kontrolną IgG i które wykazywały znaczący naciek komórek komórek jednojądrzastych (Figura 6, b i c), wykazywały wiele komórek TUNEL-dodatnich w okołonaczyniowych mankietach zapalnych i sąsiedniej istocie białej (630. 45 i 570. 60 komórek dodatnich / mm2; Figura 6, fid, przedstawia reprezentatywne sekcje). Jednak wyraźne zmniejszenie liczby i intensywności komórek apoptotycznych można było znaleźć w odcinkach OUN szczurów, które traktowano specyficznymi dla FasL przeciwciałami Ab (mniej niż 40 komórek dodatnich / mm 2. Figura 6h przedstawia reprezentatywną część, P <0,001 w porównaniu do figury 6f i figury 6g). Interesujące jest to, że na tym etapie choroby (2 dni po jego wystąpieniu) trudno było wykryć komórki infekujące jednojądrzaste apoptoty w dowolnej z tych sekcji (Figura 6, e (h), co sugeruje, że immunoterapia specyficzna wobec FasL zapobiega apoptozie docelowych komórek OUN; . Figura 5 Podanie AbL specyficznych dla FasL we wczesnym stadium choroby nadaje oporność na EAE. (a) Szczury Lewis immunizowano p68-86 / CFA w celu wytworzenia aktywnego EAE (dzień 0). W różnych punktach czasowych (dni 7, 9, 10 i 12) tym szczurom podawano 100 .g / szczura oczyszczonych swoistych dla FasL przeciwciał, uzyskanych jak opisano w legendzie do fig. 3. Szczurom kontrolnym podawano albo IgG z szczury, które zaszczepiono pcDNA3, a następnie poddano aktywnej indukcji choroby (Figura 1, dzień 13) lub IgG od naiwnych szczurów Lewisa. Wszystkie szczury były następnie monitorowane pod kątem objawów klinicznych codziennie przez obserwatora niewidomego w protokole leczenia. Wyniki przedstawiono jako średnią ocenę kliniczną sześciu szczurów na grupę. SE. (b) szczurom Lewis podawano L68-86 w celu indukcji przeniesionego EAE (dzień 0). W dniach 4 i 5 szczurom podano 100 .g / szczura każdego z Ab opisanego w a. Wszystkie szczury były monitorowane pod kątem objawów klinicznych codziennie przez obserwatora niewidomego w protokole leczenia. Wyniki przedstawiono jako średnią ocenę kliniczną sześciu szczurów na grupę. SE. Figura 6 Histologia CN i apoptoza in situ po wczesnym podaniu przeciwciał Ab Fass. Dwanaście dni po aktywnej indukcji EAE uśmiercono reprezentatywne szczury z każdej z grup opisanych w legendzie do Figury 5a. Odcinki dolnego odcinka piersiowego i lędźwiowego rdzenia kręgowego trzech różnych szczurów na grupę poddano barwieniu histologicznemu (a-d) i in situ TUNEL (e. H). Każda sekcja została oceniona bez wiedzy o statusie leczenia zwierzęcia. Reprezentatywne wybarwienie z każdej grupy pokazano (x 40) jak następuje: a i e, naiwny szczur; b i f, kontrolny szczur EAE traktowany PBS; c i g, kontrolny szczur EAE traktowany IgG; Szczur EAE potraktowany d i h, anty-FasLa. Analizy histomorfometryczne wykonano na 18 różnych polach z każdej grupy i podano w tekście. Strzałki wskazują komórki apoptotyczne. Podawanie swoistych dla FasL przeciwciał w późnym stadium choroby opóźnia powrót do zdrowia z ostrej fazy [patrz też: hydrokolonoterapia poznań, sanatorium krystyna busko, opieka na członka rodziny ] [patrz też: hydrokolonoterapia warszawa, hydrokolonoterapia poznań, hydrokolonoterapia wrocław ]