CD44 jest miejscem wiązania makrofagów dla Mycobacterium tuberculosis, które pośredniczy w rekrutacji makrofagów i ochronnej odporności przeciwko gruźlicy czesc 4

Następnie prątki wirowano przez 15 minut przy 2000 gi inkubowano ze znakowanym FITC mysim antyludzkim CD44std Ab (IgG1, klon SFF304, Bender MedSystems) przez 30 minut na lodzie. Po inkubacji prątki odwirowano, przemyto buforem FACS i utrwalono 2% paraformaldehydem. Wiązanie CD44 analizowano na FACScan (Becton Dickinson and Co.). Liczba bakterii. Grupy ośmiu myszy na punkt czasowy uśmiercono 2 lub 5 tygodni pi, a płuca, wątrobę i śledzionę usunięto aseptycznie. Narządy homogenizowano za pomocą homogenizatora tkankowego (BioSpec Products Inc., Bartlesville, Oklahoma, USA) w 5 objętościach jałowego 0,9% NaCl, a dziesięciokrotne seryjne rozcieńczenia umieszczano na płytkach agarowych Middlebrook 7H11 w celu określenia ładunków bakteryjnych. Kolonie liczono po 21-dniowym okresie inkubacji w 37 ° C. W przypadku pomiarów cytokin homogenaty płuc rozcieńczono 1: buforem do lizy (150 mM NaCl, 15 mM Tris, mM MgCl2 [pH 7,4], mM CaCl2, 1% Triton, 20 ng / ml pepstatyny A, 20 ng / ml leupeptynę i 20 ng / ml aprotyniny) i inkubowano na lodzie przez 30 minut. Supernatanty sterylizowano stosując filtr 0,22 .m (Corning Inc., Corning, New York, USA) i zamrażano w ~ 20 ° C aż do wykonania testów. Opóźniona reakcja nadwrażliwości na PPD. Aby zmierzyć odpowiedzi DTH, zbadaliśmy obrzęk odpowiedzi u stóp myszy. Pokrótce, CD44 + / + i CD44. /. myszy (n = 5) immunizowano śródskórnie u podstawy ogona 0,1 mg zabitego ciepłem M. tuberculosis H37Ra (Difco Laboratories) w 0,1 ml oleju mineralnego (Sigma-Aldrich). Dwanaście dni po immunizacji myszy prowokowano 40 .g PPD w roztworze soli na jedną tylną łopatkę i samą solankę w drugiej. Pomiary grubości stopy wykonano za pomocą mikrometru inżynierskiego Mitutoyo model 7326 (Mitutoyo MTI Corp., Aurora, Illinois, USA) przed i 24 godziny po próbie PPD. Zwiększenie grubości łopatki obliczono jako różnicę w pęcznieniu pomiędzy pomiarami 0- i 24-godzinnymi. Specyficzną reaktywność DTH obliczono jako różnicę pomiędzy obrzękiem wkładek podskórnych wstrzykniętych PPD i obrzękiem wkładek pod stopą z iniekcją soli fizjologicznej. Analiza statystyczna. Wszystkie wartości są wyrażone jako średnie. SEM. Porównania przeprowadzono za pomocą testów U Manna-Whitneya. Do porównania krzywych przeżycia wykorzystano analizę Kaplana-Meiera z testem logarytmicznym. Wartości P <0,05 uznano za statystycznie istotne. Wyniki Akumulacja komórek CD44 + w przedziale płucnym podczas zakażenia M. tuberculosis. Wcześniejsze badania udokumentowały, że komórki CD44high gromadzą się w płucach myszy podczas zakażenia M. tuberculosis (18. 20). Aby zweryfikować tę obserwację w naszym modelu, badaliśmy ekspresję CD44 w tkance płucnej myszy dzikiego typu, zakażonych donosowo M. tuberculosis. Barwienie immunohistochemiczne CD44 ujawniło silny wzrost liczby komórek CD44 + w tkance płucnej myszy z M. tuberculosis (Figura 1, a vs. b). Figura Ekspresja CD44 w tkance płucnej myszy CD44 + / + po zakażeniu donosowym x 105M. gruźlica. Reprezentatywny widok płuc niezainfekowanej myszy barwionej na CD44, pokazujący tylko kilka leukocytów pasażera CD44 + (a), w porównaniu z płucem myszy 5 tygodni po zakażeniu M. tuberculosis, wykazującym znaczny napływ leukocytów CD44 + (b). × 50. CD44 promuje rekrutację Ms i limfocytów do zainfekowanych płuc. Aby zbadać, czy CD44 bierze udział w rekrutacji leukocytów, oceniliśmy liczbę i fenotypy leukocytów płucnych z CD44 + / + i CD44 P / /. myszy podczas gruźlicy (Tabela 1). W tym celu zarażono donosowo osiem myszy w grupie x 105 CFU M. tuberculosis i uśmiercano je po 2 lub 5 tygodniach. Podczas gdy bezwzględna liczba leukocytów w płucach CD44 + / + i CD44a /. myszy były podobne 2 tygodnie po, CD44. /. myszy miały prawie 50% mniej Ms w ich komorze płucnej niż myszy CD44 + / + (P <0,05). Po 5 tygodniach pi płuca CD44. /. myszy zawierały więcej leukocytów niż płuca myszy CD44 + / + (P <0,05). W tym punkcie czasowym procent Ms był podobny w obu szczepach myszy. Procent limfocytów płucnych CD44. /. jednak myszy znacznie zmniejszyły się w porównaniu do myszy CD44 + / + 5 tygodni po pi (P <0,05). Podanie limfocytów po 2 tygodniach wykazało, że odsetki komórek T CD4 + i CD8 + były podobne w obu grupach (dane nie pokazane). Pięć tygodni pi, CD44. /. myszy wykazywały niższy odsetek komórek CD3 / CD4 + (59. 2 w porównaniu z 64. 0,4), podczas gdy odsetek komórek T CD3 / CD8 + był podobny w obu szczepach (dane nie pokazane). Procent PMN w płucach CD44. /. myszy zwiększono w porównaniu z myszami CD44 + / + w obu punktach czasowych (P <0,05). Tabela Wpływ niedoboru CD44 na skład komórkowy wszystkich komórek płuc podczas gruźlicy Zmniejszone tworzenie ziarniaków w CD44. /. myszy [podobne: multimed zamość, apteka całodobowa bydgoszcz, mąka ziemniaczana jako puder ] [hasła pokrewne: odziejsie, multimed zamość, ziaja dermatologiczna baza z tlenkiem cynku ]