CD44 jest miejscem wiązania makrofagów dla Mycobacterium tuberculosis, które pośredniczy w rekrutacji makrofagów i ochronnej odporności przeciwko gruźlicy ad 6

Cząsteczki adhezyjne mogą odgrywać rolę w patogenezie zakażeń drobnoustrojami poprzez pośredniczenie w fagocytozie patogenów (28). W celu określenia, czy CD44 ulegający ekspresji na M. S pośredniczy w wiązaniu się z prątkiem gruźlicy, zainfekowaliśmy wyizolowane CD44 + / + i CD44y / p. Ms z żywym M. tuberculosis przez 2 godziny i określił liczbę CFU przez wysianie M. lizaty. Jak pokazano na Figurze 4a, Mysie CD44 + / + zawierały duże obciążenie prątkami. Co ciekawe, osiem razy mniej M. tuberculosis było związane z CD44. /. Ms niż z CD44 + / + Ms (P <0,05). Dodatkowo, zidentyfikowaliśmy kwasooporne prątki internalizowane przez Mss z plamą Ziehl-Neelsena w celu zbadania, czy fagocytoza M. tuberculosis przez CD44. /. M. S był upośledzony (rysunek 4b). Średnia liczba ogarniętych bakterii na M. było znacznie niższe w CD44. /. Ms (0,18 na Mff) niż w MRS CD44 + / + (0,31 na M, P <0,05) po 2 godzinach. Po 17 godzinach prawie trzy razy mniej prątków poddano fagocytozie za pomocą CD44. /. Ms (0,23 na Mff) niż przez mR CD44 + / + (0,63 na M, P <0,05). Łącznie wyniki te wskazują, że w tym modelu in vitro, związany z M3 CD44 przyczynia się do wiązania i późniejszego wychwytu M. tuberculosis. Figura 4CD44 bierze udział w wiązaniu i fagocytozie M. tuberculosis przez Ms. Fagocytoza M. S wyizolowana z myszy CD44 + / + (białe słupki) i CD44. /. myszy (czarne słupki) zbadano przez zliczenie CFU (MOI 10, a) lub wewnątrzkomórkowych prątków kwasowych (MOI 2, b). Dane są wyświetlane jako średnie. SEM z pięciu myszy na grupę. * P <0,05 w porównaniu z kontrolą. CD44 wiąże się z M. tuberculosis. Rola CD44 w pośredniczeniu w wiązaniu prątków była dalej badana przez inkubację ludzkiego rekombinowanego CD44std z żywą M. tuberculosis. Analiza cytometrii przepływowej wiązania powierzchniowego prątków gruźlicy z CD44 wykazała wyraźne przesunięcie intensywności fluorescencji (Figura 5). Prawie trzykrotnie wyższą intensywność fluorescencji obserwowano w M. tuberculosis inkubowanej z CD44std, a następnie barwionej anty-CD44-FITC (średnia fluorescencja kanału 94. 8) niż w prątkach traktowanych tylko anty-CD44-FITC (średnia fluorescencja kanałowa 34. 14) (Figura 5, P <0,05). Ponadto większość prątków barwionych ujemnie po inkubacji z anty-CD44std-FITC (średnia 15,4%. 4,8%), podczas gdy 50,6%. 1,9% M. tuberculosis inkubowanych z rekombinowanym CD44std stało się FITC-dodatnie, co wskazuje na bezpośrednie wiązanie CD44 z prątkami (P <0,05). Figura 5 Związanie CD44 z prątkami M. tuberculosis. Mycobacteria inkubowano z (cienką linią) lub bez (grubej linii) zrekombinowanym ludzkim CD44std przez 30 minut w 37 ° C, po czym wiązanie CD44 wykrywano anty-ludzkim CD44std Ab znakowanym FITC i oznaczano ilościowo za pomocą cytometrii przepływowej. Obserwowano zmianę intensywności fluorescencji dla wiązania ludzkiego CD44std do M. tuberculosis (około trzy razy większa niż kontrola). Zwiększone obciążenie bakteryjne w płucach i wątrobie CD44. /. myszy. Następnie badaliśmy wpływ niedoboru CD44 na kontrolę wzrostu prątków. Jak pokazano na Figurze 6, od 2 tygodni do 5 tygodni, M. tuberculosis rosło wolniej u myszy CD44 + / + niż u CD44a /. myszy. W konsekwencji CD44. /. myszy miały 2,6-krotnie i siedmiokrotnie więcej prątków w płucach, niż myszy CD44 + / + po 2 tygodniach pi (P <0,05) i 5 tygodniach pi (P <0,05), odpowiednio. Ponadto wątróbki CD44. /. myszy zawierały więcej prątków niż wątroby myszy CD44 + / + (P <0,05 w 5 tygodniu). Przeciwnie, liczba CFU M. tuberculosis odzyskanych ze śledziony była podobna w obu szczepach myszy w każdym punkcie czasowym. Figura 6 Wpływ niedoboru CD44 na wzrost prątków w płucach, wątrobie i śledzionie myszy zakażonych M. tuberculosis. Myszy podawano donosowo x 105M. gruźlica H37Rv. Dane są wyświetlane jako średnie. SEM ośmiu myszy. * P <0,05 w porównaniu z kontrolą. Zmniejszone przeżycie w CD44. /. Zakażonym M. tuberculosis. myszy. Aby zbadać, czy niedobór CD44 ma również wpływ na przeżycie, CD44. /. i myszy CD44 + / + (n = 10 na grupę) zakażono donosowo M. tuberculosis, a przeżycie monitorowano przez 7 miesięcy. W porównaniu z myszami CD44 + / +, CD44. /. myszy wykazały znaczną redukcję przeżycia (figura 7). Po 210 dniach pi, przeżycie CD44. /. myszy stanowiły 60%, podczas gdy wszystkie myszy CD44 + / + pozostały żywe podczas tego okresu obserwacji (P <0,05). Tak więc, różnice w obciążeniach bakteryjnych w płucach i wątrobie były zrównoleglone różnicami w przeżyciu, wspierając ochronną rolę CD44 w odpowiedzi immunologicznej na M. tuberculosis. Ryc. 7 Wpływ niedoboru CD44 na przeżycie. CD44 + / + i CD44. /. myszy (n = 10 na grupę) zakażono donosowo x 105M [hasła pokrewne: orbitrek efekty po miesiącu, protruzja krążka międzykręgowego, bromatologia i chemia toksykologiczna ] [patrz też: kromed grybów, fenistil ulotka, supradyn opinie ]