CD44 jest miejscem wiązania makrofagów dla Mycobacterium tuberculosis, które pośredniczy w rekrutacji makrofagów i ochronnej odporności przeciwko gruźlicy ad 5

Następnie badaliśmy udział CD44 w histopatologii płuc u myszy zakażonych M. tuberculosis. W 2 tygodnie po zakażeniu, płuca myszy CD44 + / + wykazywały ostro odgraniczone ziarniniaki, zwykle zlokalizowane wokół małych oskrzeli i naczyń. Te ziarniniaki składały się z limfocytów i Ms (Figura 2a). Wręcz przeciwnie, CD44. /. myszy nie były w stanie uformować dobrze ukształtowanych ziarniniaków w reakcji na M. tuberculosis, ale wykazywały powiększone i dezorganizowane zmiany obejmujące głównie PMN (Figura 2b). W 5 tygodniu po zakażeniu zapalenie stało się bardziej rozproszone w CD44 + / + i CD44. /. myszy. Podczas gdy nacieki w płucach od myszy CD44 + / + nadal w przeważającej części składały się z limfocytów i Ms (Figura 2c), PMN były bardziej dominujące w płucach CD44a /. myszy (Figura 2d). Ponadto obrzęk i zapalenie opłucnej były bardziej wyraźne w CD44. /. niż u myszy CD44 + / +. Figura 2 Reprezentatywne przekroje histopatologiczne płuc CD44 + / + (a i c) i CD44a /. (b i d) myszy po inokulacji M. tuberculosis. (a) Charakterystyczny mały ziarniak w płucu myszy CD44 + / + 2 tygodnie po zakażeniu M. tuberculosis (powiększenie, x 50, barwienie H & E). (b) W przeciwieństwie do CD44. /. myszy nie były w stanie uformować dobrze ukształtowanych ziarniniaków, a płuca wykazywały rozproszony naciek zapalny w dużej mierze złożony z PMN (powiększenie, x 50, barwienie H & E). (c) W 5 tygodniu po zakażeniu obserwowano dyfuzyjne, prawie zlejące zapalenie w płucach myszy CD44 + / +. Limfocyty i Ms reprezentowały większość leukocytów (powiększenie, x 100, barwienie H & E). (d) W tym samym punkcie czasowym płuca CD44. /. myszy wykazywały rozlany granulocytarny naciek zapalny (oryginalne powiększenie, x 100; zabarwienie H & E). Nagromadzenie komórek typu w śledzionach CD44. /. myszy. Ponieważ CD44 jest zaangażowany w migrację leukocytów do miejsc zapalenia, ustaliliśmy liczbę komórek w śledzionie podczas gruźlicy w CD44. /. i myszy CD44 + / +. Po 2 i 5 tygodniach pi, odpowiednio o 35% i 54% więcej komórek uzyskano ze śledzion CD44. /. myszy niż ze śledziony myszy CD44 + / + (P <0,05) (Figura 3a). Aby uzyskać wgląd w funkcjonalne właściwości splenocytów, oceniliśmy ich zdolność do wytwarzania cytokin typu (IFN-a) i typu 2 (IL-4) po stymulacji PPD specyficzną dla antygenu. Intrygująco, splenocyty CD44a /. myszy wydzielają 12 razy (P <0,05) i 7,5 razy (P <0,05) więcej ochronnego IFN-y. odpowiednio po 2 i 5 tygodniach pi niż splenocyty myszy CD44 + / + (Figura 3b). IL-4 była niewykrywalna we wszystkich próbkach. Aby wykluczyć, że wzmocniony IFN-y produkcja CD44. /. Splenocyty były konstytutywnie obecne, pobudziliśmy splenocyty z pięciu niezainfekowanych CD44a /. i myszy CD44 + / + z czterema różnymi stymulatorami (CD3 / 28, SEB, SEA i PPD). Stwierdziliśmy, że niedobór CD44 per se nie wpływał na IFN-y uwalnianie przez naiwne splenocyty (dane nie pokazane). Figura 3 Wpływ niedoboru CD44 na komórkowość i IFN-y odpowiedź splenocytów myszy CD44 + / + (białe słupki) i CD44a /. myszy (czarne słupki) 2 i 5 tygodni pi Splenocyty zdysocjowano do zawiesiny pojedynczych komórek, policzono i stymulowano (1 x 106 komórek na studzienkę) przez 48 godzin z PPD. (a) CD44. /. myszy mają zwiększoną komórkowość śledzion w porównaniu z myszami CD44 + / +. (b) Stymulowane splenocyty z zakażonego CD44a /. myszy wypuszczają więcej IFN-y w odpowiedzi na PPD niż splenocyty z zainfekowanych myszy CD44 + / +. Dane są średnie. SEM ośmiu myszy na grupę. * P <0,05. Zmniejszone stężenia cytokin w nieobecności CD44. Aby uzyskać wgląd w wpływ CD44 na lokalne stężenia cytokin typu i 2 podczas gruźlicy, zmierzono IFN-y i IL-2 (typ 1) oraz IL-4 i IL-10 (typ 2), w homogenatach płuc po 2 i 5 tygodniach pi W obu punktach czasowych poziomy płuc tych cytokin były niższe w CD44a / p. niż u myszy CD44 + / + (Tabela 2). Aby ocenić wpływ niedoboru CD44 na ekspresję cytokin i chemokin przez Ms, zainfekowaliśmy izolowane CD44 + / + i CD44 P / /. Ms z żywą M. tuberculosis przez 24 godziny. Stwierdziliśmy, że stężenia TNF-a, MIP-1 (3 i IFN-a w supernatantach CD44. /. Ms były niższe niż w supernatantach CD44 + / + Ms (Tabela 3). Tabela 2 Wpływ niedoboru CD44 na indukowaną przez M. tuberculosis. Cytokiny typu (IFN-a i IL-2) i cytokiny typu 2 (IL-4 i IL-10) w płucach Tabela 3 Wpływ niedoboru CD44 na M. tuberculosis. pośredniczona indukcja cytokin (TNF-a i IFN-a) i chemokin (MIP-1 (3) w supernatantach stymulowanego Ms sprzężonego z Mp3 CD44 pośredniczy w wiązaniu i fagocytozie M. tuberculosis [patrz też: test obciążenia glukozą 75g normy, orbitrek efekty po miesiącu, vegamedica ] [podobne: test obciążenia glukozą 75g normy, vegamedica, helides cena ]