Zmiany specyficzne dla kłębuszków ekspresji VEGF-A prowadzą do wyraźnych wrodzonych i nabytych chorób nerek cd

Mocz pobrano biernie w probówce Eppendorfa od myszy 0, 3, 6 i 9-tygodniowych. Do oznaczenia obecności lub braku białka i czerwonych krwinek w moczu wykorzystano prętowy wskaźnik moczu (Chemstrip 5L, Roche Diagnostics Corp., Indianapolis, Indiana, USA). Standardowy test kolorymetryczny przeprowadzono zgodnie z instrukcjami producenta. Dodatkowo, 2 .l moczu od myszy transgenicznych lub kontrolnych umieszczono w 18 .l buforu Laemmli (18), gotowano i nanoszono na żel 12% SDS-PAGE. Na pierwszym pasie żelu wprowadzono białko o niskim zakresie białek SDS-PAGE (Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, California, USA). Read more „Zmiany specyficzne dla kłębuszków ekspresji VEGF-A prowadzą do wyraźnych wrodzonych i nabytych chorób nerek cd”

Zmiany specyficzne dla kłębuszków ekspresji VEGF-A prowadzą do wyraźnych wrodzonych i nabytych chorób nerek ad

Sugeruje to, że VEGF odgrywa rolę w utrzymywaniu bariery filtracyjnej przez przeżycie, proliferację i / lub wskaźniki różnicowania do sąsiedniej wyspecjalizowanej endoteliny. Jest oczywiste, że VEGF jest krytycznym mediatorem dla waskulogenezy, ponieważ heterozygotyczne i homozygotyczne myszy VEGF-A zanikają z dużymi wadami naczyniowymi odpowiednio po 11,5 i 9,5 dniach po stosunku (11, 12). Jednak późniejsza rola w określonych łożyskach naczyniowych, takich jak kłębuszek nerkowy, jest mniej wyraźna. Chociaż rozregulowanie ekspresji VEGF-A wykazano w wielu chorobach nerek, znaczenie tych zmian jest obecnie nieznane. Aby określić rolę VEGF-A w barierze filtracyjnej kłębuszkowej, wygenerowaliśmy myszy z uzyskaniem lub utratą funkcji VEGF specyficznie w podocytach, unikając w ten sposób efektów zarodkowych śmiercionośnych. Read more „Zmiany specyficzne dla kłębuszków ekspresji VEGF-A prowadzą do wyraźnych wrodzonych i nabytych chorób nerek ad”

Zmiany specyficzne dla kłębuszków ekspresji VEGF-A prowadzą do wyraźnych wrodzonych i nabytych chorób nerek

Choroba nerek dotyka ponad 20 milionów ludzi w samych Stanach Zjednoczonych. Chociaż przyczyny niewydolności nerek są zróżnicowane, barierą filtracji kłębuszkowej jest często cel urazu. Dys regulację ekspresji VEGF w kłębuszku nerkowym wykazano w szerokim zakresie pierwotnych i nabytych chorób nerek, chociaż znaczenie tych zmian nie jest znane. W kłębuszku VEGF-A ulega silnej ekspresji w podocytach, które stanowią główną część bariery między krwią i przestrzeniami moczowymi. W tym artykule pokazujemy, że selektywna na kłębuszkowe delecja lub nadekspresja VEGF-A prowadzi do choroby kłębuszkowej u myszy. Read more „Zmiany specyficzne dla kłębuszków ekspresji VEGF-A prowadzą do wyraźnych wrodzonych i nabytych chorób nerek”

Nowy model opryszczkowatego zapalenia skóry, który wykorzystuje transgeniczne myszy NOD HLA-DQ8 ad 9

Rekombinowana ludzka transglutamina naskórkowa została dostarczona przez nieżyjącego Petera Steinerta. Transglutaminaz ponownie zawieszono w PBS w stężeniu ug / ml i powleczono przez noc w temperaturze 4 ° C na płytkach Immulon 2 (Fisher Scientific International Inc.). Płytki blokowano roztworem soli buforowanym Tris (TBS) i 0,05% Tween-20 (Sigma-Aldrich) przez godzinę w temperaturze pokojowej. Surowice rozcieńczono 1: 100 i 1: 200 w TBS dla anty-TGe i 1: 200 i 1: 400 dla anty-tTG i inkubowano przez godzinę w temperaturze pokojowej. Wtórnym przeciwciałem była albo biotynylowana szczurzą anty-mysia IgA (1: 1000) z Accurate Chemical & Scientific Corp., albo biotynylowana anty-mysia IgG (1: 1,000) z Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc. Read more „Nowy model opryszczkowatego zapalenia skóry, który wykorzystuje transgeniczne myszy NOD HLA-DQ8 ad 9”

Nowy model opryszczkowatego zapalenia skóry, który wykorzystuje transgeniczne myszy NOD HLA-DQ8 ad 8

Chow oznaczony jako bezglutenowy był oczyszczonym składnikiem mysiej karmy uzyskanej z Research Diets Inc. (dieta gryzoni AIN-76A). Zawiera kazeinę, metioninę, cystynę, skrobię kukurydzianą, sacharozę, maltodekstrynę, celulozę, olej kukurydziany, olej sojowy, minerały i witaminy. Chow oznaczony jako normalna lub zwykła karma dla myszy (LabDiet; PMI Nutrition International) zawiera pszenicę mieloną, mączkę sojową, mączkę z kiełków pszenicy, mączkę rybną, tłuszcz zwierzęcy konserwowany hydroksyanizolem butylowym (BHA), suszoną serwatkę, kazeinę, olej sojowy, węglan wapnia gluten kukurydziany, sól, minerały i witaminy. Leczenie dapsonem. Read more „Nowy model opryszczkowatego zapalenia skóry, który wykorzystuje transgeniczne myszy NOD HLA-DQ8 ad 8”

Nowy model opryszczkowatego zapalenia skóry, który wykorzystuje transgeniczne myszy NOD HLA-DQ8 ad 7

Odkrycia te wzmacniają autoimmunologiczny charakter DH, który jest wspierany przez zwiększony związek DH z innymi chorobami autoimmunologicznymi (32). Podobnie, około 70% pacjentów z DH ma krążące IgA przeciwko retikulinie i endomysium, z których oba są markerami diagnostycznymi dla celiakii (2, 44). Powtarzający się dodatni wynik wynoszący około 70% w przypadku przeciwciał przeciw gliadynom, anty-tTG, przeciw retikulinie i przeciw endomysium prawdopodobnie odzwierciedla stan enteropatii u pacjentów z DH. Sardy i in. odnotowano w 2002 r., że większość pacjentów z DH posiada krążącej przeciwciała IgA swoiste dla TGe (30). Read more „Nowy model opryszczkowatego zapalenia skóry, który wykorzystuje transgeniczne myszy NOD HLA-DQ8 ad 7”

Nowy model opryszczkowatego zapalenia skóry, który wykorzystuje transgeniczne myszy NOD HLA-DQ8 ad 6

Jednakże niemożność wykrycia tych przeciwciał lub jakiejkolwiek enteropatii u myszy, które przebadaliśmy, nie zmniejsza bardziej uderzających podobieństw immunopatologicznych do DH, które obejmują zależność DQ8, ograniczenie glutenu i odkładanie IgA poniżej blaszki densa. W związku z tym ustaliliśmy, że ta choroba pęcherzykowa jest zgodna z DH. Szereg czynników przyczynia się do rozwoju pęcherzyków występujących w tym modelu myszy. Pierwszym z nich jest ekspresja HLA-DQ8. Ta cząsteczka MHC określa wrażliwość na gluten, jak opisali Black i in. Read more „Nowy model opryszczkowatego zapalenia skóry, który wykorzystuje transgeniczne myszy NOD HLA-DQ8 ad 6”

Nowy model opryszczkowatego zapalenia skóry, który wykorzystuje transgeniczne myszy NOD HLA-DQ8 ad 5

Nie obserwowano pęcherzyków u myszy NOD Abo DQ8 +, którym podawano alternatywnie samą toksynę krztuścową, wstrzyknięto sam gluten, podawano tylko zgłębnik glutenowy, wstrzyknięto toksynę krztuścową i gluten bez zgłębnika glutenu lub wstrzyknięto tylko toksynę krztuścową i podano zgłębnik glutenowy. Osady IgA wykryto w nie zmienionej skórnie części 11 z 15 pęcherzykowatych myszy. Nie znaleziono złogów IgG u żadnej z 15 pęcherzastych myszy. Dziewięciu z 15 pęcherzykowatych myszy leczono dietą bezglutenową z daptonem lub bez niego miesiąc po pierwszej prezentacji pęcherzy, a ich pęcherze i zapalenie skóry ustąpiły. Trzy myszy, które były leczone dietą bezglutenową i dapsonem, miały ustąpienie pęcherza w ciągu tygodnia, podczas gdy 6, które były leczone samą dietą bezglutenową, wymagało 2-3 tygodni na ustąpienie pęcherzy. Read more „Nowy model opryszczkowatego zapalenia skóry, który wykorzystuje transgeniczne myszy NOD HLA-DQ8 ad 5”

Nowy model opryszczkowatego zapalenia skóry, który wykorzystuje transgeniczne myszy NOD HLA-DQ8 czesc 4

Strzałki identyfikują złogi IgA, a strefa błony podstawnej zaznaczona jest przerywaną białą linią. Uzależnienie pęcherzenia od glutenu. Aby ustalić, czy zjawisko powstawania pęcherzyków obserwowane u transgenicznej myszy NOD HLA-DQ8 było zależne od spożycia glutenu, 9 myszy uczulonych na gluten, które miały rozwinięte pęcherze, umieszczono na diecie bezglutenowej z lub bez leczenia dapsonem i monitorowano pod kątem dalszych pęcherzy. . Rozdzielenie pęcherzy wystąpiło w ciągu tygodnia po tym, jak 3 myszy otrzymały dietę bezglutenową i potraktowano dapsonem. Read more „Nowy model opryszczkowatego zapalenia skóry, który wykorzystuje transgeniczne myszy NOD HLA-DQ8 czesc 4”

Nowy model opryszczkowatego zapalenia skóry, który wykorzystuje transgeniczne myszy NOD HLA-DQ8 cd

Dotknięta tkanka okazała się również wrażliwa na myszy, ponieważ często drapały one uszy po dotknięciu. Takie zachowanie przypomina naśladowanie pacjentów z DH, u których zazwyczaj występuje znaczny świąd zaangażowanych miejsc na skórze. Histopatologia ucha. Skóry odbarwione wybarwione H & E ujawniły podnaskórkowe pęcherze z mieszanymi infiltratami górnych i środkowych skórnych naskórek złożonymi z neutrofili, eozynofili, limfocytów i histiocytów, jak widać na Figurze 2. Biopsje przeprowadzono na wszystkich 15 myszach z pęcherzem. Read more „Nowy model opryszczkowatego zapalenia skóry, który wykorzystuje transgeniczne myszy NOD HLA-DQ8 cd”